Résumé: Selil souch mezenchymal yo se yon gwoup selil souch pluripotent ki ka izole nan mezodèm la.Avèk renouvèlman pwòp tèt ou-replikasyon yo ak karakteristik diferansyasyon milti-direksyon yo, yo posede yon gwo potansyèl pou divès terapi nan medikaman.Selil souch mesenchymal yo gen yon fenotip iminitè inik ak kapasite iminitè regilasyon.Se poutèt sa, selil souch mesenchymal yo deja lajman itilize nan transplantasyon selil souch, jeni tisi, ak transplantasyon ògàn.Ak pi lwen pase aplikasyon sa yo, yo itilize yo kòm yon zouti ideyal nan jeni tisi kòm selil seeder nan yon seri eksperyans rechèch debaz ak klinik.Jiska kounye a, pa gen yon metòd lajman aksepte ak estanda pou kontwòl kalite selil souch mesenchymal yo.Countstar Rigel ka kontwole konsantrasyon, viabilite, ak karakteristik fenotip (ak chanjman yo) pandan pwodiksyon ak diferansyasyon selil souch sa yo.Countstar Rigel a gen tou avantaj nan jwenn plis enfòmasyon mòfolojik, ki bay pa pèmanan brightfield ak anrejistreman imaj ki baze sou fluoresans pandan tout pwosesis la nan siveyans kalite selil.Countstar Rigel ofri yon metòd rapid, sofistike ak serye pou kontwòl kalite selil souch yo.
Materyèl ak metòd:
Selil tij mesenchymal ki sòti adipoz (AdMSCs) te don pa Pwofesè Nianmin Qi, solisyon tach AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antikò: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC yo te kiltive nan yon enkibatè imidite 37 ℃, 5% CO2.Dijere ak tripsin anvan ou itilize.
Yo te swiv pwosedi tach makè CD kòm manyèl antikò.
Deteksyon makè CD ak Countstar Rigel:
1. Yon pwosedi aplikasyon siyal-koulè te kreye pa mete kanal PE a imaj PE fluoresans.
2. 3 jaden yo te kaptire nan chak chanm.
3. Apre imaj ak analiz inisyal yo te konplete, papòt (log gate) anviwònman pou transfeksyon pozitif ak negatif te etabli pa lojisyèl FCS.
Kontwòl kalite selil souch
Figi sa a (Figi 1) montre pwosedi a terapi selil souch .
Figi 1: Pwosedi pou terapi selil souch
Rezilta:
Detèmine konsantrasyon, viabilite, dyamèt, ak agrégation nan AdMSCs.
Viabilite AdMSC yo te detèmine pa AO/PI, Yon pwosedi aplikasyon doub koulè te kreye pa mete chanèl vèt ak chanèl wouj nan imaj AO ak PI fluoresans, plis yon jaden klere.Egzanp imaj yo te montre nan Figi 2.
Figi 2. Imaj anvan transpò ak apre transpò AdMSC yo.A. Anvan transpò;yo montre yon imaj reprezantan.B. Apre transpò;yo montre yon imaj reprezantan.
Viabilite AdMSC yo te chanje drastikman apre transpò lè yo konpare ak anvan transpò.Viabilite anvan transpò a te 92%, men li redwi a 71% apre transpò.Rezilta a te montre nan figi 3.
Figi 3. Rezilta viabilite AdMSCs (Avan transpò ak apre transpò)
Dyamèt la ak agrégation te detèmine tou pa Countstar Rigel.Dyamèt AdMSC yo te chanje drastikman apre transpò lè yo konpare ak anvan transpò.Dyamèt anvan transpò a te 19µm, men li te ogmante a 21µm apre transpò.Agregasyon anvan transpò a te 20%, men li te ogmante a 25% apre transpò.Soti nan imaj yo te kaptire pa Countstar Rigel, fenotip AdMSC yo te chanje drastikman apre transpò.Rezilta yo te montre nan figi 4.
Figi 4: Dyamèt ak rezilta agrégation.A: Imaj reprezantan AdMSC yo, fenotip AdMSC yo te chanje drastikman apre transpò.B: Agregasyon anvan transpò a te 20%, men li te ogmante a 25% apre transpò.C: Dyamèt anvan transpò a te 19µm, men li te ogmante a 21µm apre transpò.
Detèmine iminofenotip AdMSCs pa Countstar Rigel
Iminofenotip AdMSC yo te detèmine pa Countstar Rigel, AdMSC yo te enkube ak diferan antikò respektivman (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Yon pwosedi aplikasyon siyal-koulè te kreye pa mete yon chanèl Green nan imaj PE fluoresans, plis yon jaden klere.Segmantasyon referans foto jaden klere te aplike kòm yon mask pou echantiyon siyal fluoresans PE a.Rezilta CD105 yo te montre (Figi 5).
Figi 5: Rezilta CD105 AdMSC yo te detèmine pa Countstar Rigel.A: analiz quantitative de pousantaj pozitif CD105 nan diferan echantiyon yo genyen pa FCS eksprime 5 plis lojisyèl.B: Imaj kalite siperyè bay plis enfòmasyon mòfolojik.C: Rezilta valide pa ti miniature chak selil sèl, zouti lojisyèl FCS yo divize selil yo an diferan gwoup dapre diferan ekspresyon pwoteyin yo.
Lòt rezilta antikò yo te montre nan Fig 6
Figi 6: A: Yon imaj reprezantan ASCs ak mòfoloji tipik ki gen fòm file koton.Te kaptire pa mikwoskòp OLYMPUS.Agrandisman orijinal, (10x).B: Diferansasyon adipojenik nan ASC yo pwouve pa tach wouj Ruthenium ki montre zòn nan mineralizasyon.Te kaptire pa mikwoskòp OLYMPUS.Agrandisman orijinal (10x).C: Countstar FL karakterizasyon ASCs.
Rezime:
Countstar FL ka kontwole konsantrasyon, viabilite, ak karakteristik fenotip (ak chanjman yo) pandan pwodiksyon ak diferansyasyon selil souch sa yo.FCS eksprime founi fonksyon an revize chak selil siyal, valide done yo atravè imaj la.Itilizatè a kapab tou gen konfyans nan pote soti nan pwochen eksperyans yo ki baze sou rezilta Countstar Rigel.Countstar Rigel ofri yon metòd rapid, sofistike ak serye pou kontwòl kalite selil souch yo.
