A Countstar rendszer a képcitométert és a sejtszámlálót egyetlen asztali műszerben egyesíti.Ez az alkalmazásvezérelt, kompakt és automatizált sejtleképező rendszer minden az egyben megoldást kínál a rákos sejtkutatáshoz, beleértve a sejtszámlálást, az életképességet (AO/PI, tripánkék), az apoptózist (Annexin V-FITC/PI), a sejteket. ciklus (PI) és GFP/RFP transzfekció.
Absztrakt
A rák világszerte az egyik fő halálok, és nagy jelentőséggel bír az új rákkezelési módszerek kidolgozása.A rákos sejt a rák alapkutatási tárgya, a rákos sejtből különféle információkat kell kiértékelni.Ez a kutatási terület gyors, megbízható, egyszerű és részletes sejtelemzést igényel.A Countstar rendszer egyszerű megoldási platformot biztosít a rákos sejtek elemzéséhez.
Countstar Rigel tanulmányozza a ráksejtek apoptózisát
Az apoptózisvizsgálatokat számos laboratóriumban rutinszerűen alkalmazzák különféle célokra, a sejttenyészetek egészségi állapotának felmérésétől a vegyületcsoport toxicitásának értékeléséig.
Az apoptózisvizsgálat egy olyan típus, amelyet a sejtek apoptózis százalékának meghatározására használnak Annexin V-FITC/PI festési módszerrel.Az Annexin V a foszfatidil-szerinhez (PS) kötődik a korai apoptózis sejttel vagy nekrózis sejtekkel.A PI csak a nekrotikus/nagyon késői stádiumú apoptotikus sejtekbe jut be.(1.ábra)
A: Korai apoptózis Annexin V (+), PI (-)
B: Késői apoptózis Annexin V (+), PI (+)
1. ábra: Az Annexin V FITC-vel és PI-vel kezelt 293-as sejt Countstar Rigel képeinek kinagyított részletei (5-szörös nagyítás)
A rákos sejt sejtciklus-elemzése
A sejtciklus vagy sejtosztódási ciklus a sejtben végbemenő események sorozata, amely a DNS osztódásához és megkettőzéséhez (DNS-replikációhoz) vezet, és így két leánysejt keletkezik.A sejtmaggal rendelkező sejtekben, akárcsak az eukariótákban, a sejtciklus három szakaszra oszlik: interfázisra, mitotikus (M) fázisra és citokinézisre.A propidium-jodid (PI) egy sejtmagfestő festék, amelyet gyakran használnak a sejtciklus mérésére.Mivel a festék nem tud bejutni az élő sejtekbe, a sejteket a festés előtt etanollal rögzítik.Ezután az összes sejtet megfestjük.Az osztódásra készülő sejtek egyre nagyobb mennyiségű DNS-t tartalmaznak, és arányosan megnövekedett fluoreszcenciát mutatnak.A fluoreszcencia intenzitásbeli különbségeit használjuk a sejtek százalékos arányának meghatározására a sejtciklus egyes fázisaiban.A Countstar képes rögzíteni a képet, és az eredmények az FCS expressz szoftverben jelennek meg.(2. ábra)
2. ábra: Az MCF-7-et (A) és a 293T-t (B) PI-t tartalmazó sejtciklus-detektáló készlettel festettük meg, az eredményeket Countstar Rigel határozta meg, és FCS expressz segítségével analizálta.
Életképesség és GFP transzfekció meghatározása sejtben
A biofolyamat során a GFP-t gyakran használják indikátorként rekombináns fehérjével való fuzionálására.Határozza meg, hogy a GFP fluoreszcens képes-e tükrözni a célfehérje expresszióját.A Countstar Rigel gyors és egyszerű tesztet kínál a GFP transzfekció és az életképesség tesztelésére.A sejteket Propidium-jodiddal (PI) és Hoechst 33342-vel festettük, hogy meghatározzuk az elhalt sejtpopulációt és a teljes sejtpopulációt.A Countstar Rigel egy gyors, kvantitatív módszert kínál a GFP expressziós hatékonyságának és életképességének egyidejű értékelésére.(4. ábra)
4. ábra: A sejteket Hoechst 33342 (kék) segítségével határozzuk meg, és a GFP-t expresszáló sejtek százalékos aránya (zöld) könnyen meghatározható.Az életképtelen sejteket propidium-jodiddal (PI; piros) megfestjük.
Életképesség és sejtszám
Az AO/PI kettős fluoreszcencia számlálás a sejtkoncentráció, életképesség kimutatására használt vizsgálati típus.Különböző sejttípusok szerint sejtvonalszámlálásra és elsődleges sejtszámlálásra oszlik.Az oldat a zölden fluoreszkáló nukleinsavfesték, az akridinnarancs és a vörösfluoreszcens nukleinsavfesték, a propidium-jodid kombinációját tartalmazza.A propidium-jodid egy membránkizáró festék, amely csak a sérült membránnal rendelkező sejtekbe jut be, míg az akridinnarancs a populáció összes sejtjébe.Ha mindkét színezék jelen van a sejtmagban, a propidium-jodid csökkenti az akridinnarancs fluoreszcenciáját a fluoreszcencia rezonancia energiatranszfer (FRET) révén.Ennek eredményeként az ép membránnal rendelkező magos sejtek fluoreszkáló zöldre festődnek, és élőnek számítanak, míg a károsodott membránnal rendelkező magos sejtek csak fluoreszkáló vörösre festődnek, és a Countstar Rigel rendszer használatakor elhaltnak számítanak.A nem magozott anyagok, mint például a vörösvértestek, vérlemezkék és törmelékek nem fluoreszkálnak, és a Countstar Rigel szoftver figyelmen kívül hagyja őket.(5. ábra)
5. ábra: A Countstar optimalizálta a kettős fluoreszcens festési módszert a PBMC-koncentráció és életképesség egyszerű, pontos meghatározására.Az AO/PI-vel festett minták a Countstar Rigel segítségével elemezhetők
