Az AOPI kettős fluoreszcens számlálás a sejtkoncentráció és életképesség kimutatására használt vizsgálati típus.Az oldat az akridinnarancs (a zölden fluoreszkáló nukleinsav festés) és a propidium-jodid (a vörös fluoreszcens nukleinsav festés) kombinációja.A propidium-jodid (PI) egy membránkizáró festék, amely csak a sérült membránnal rendelkező sejtekbe jut be, míg az akridinnarancs képes behatolni a populáció összes sejtjébe.Ha mindkét színezék jelen van a sejtmagban, a propidium-jodid csökkenti az akridinnarancs fluoreszcenciáját a fluoreszcencia rezonancia energiatranszfer (FRET) révén.Ennek eredményeként az ép membránnal rendelkező magos sejtek fluoreszkáló zöldre festődnek, és élőnek számítanak, míg a károsodott membránnal rendelkező magos sejtek csak fluoreszkáló vörösre festődnek, és a Countstar® FL rendszer használatakor elhaltnak számítanak.A mag nélküli anyagok, mint például a vörösvértestek, vérlemezkék és törmelékek nem fluoreszkálnak, és a Countstar® FL szoftver figyelmen kívül hagyja őket.
Az őssejtterápia folyamata
4. ábra A mezenchimális őssejtek (MSC) életképességének és sejtszámának monitorozása a sejtterápiákban való felhasználáshoz.
Határozza meg az MSC életképességét AO/PI és Trypan Blue assay segítségével
2. ábra A. Az AO/PI-vel és Trypan Blue-val festett MSC képe;2. Az AO/PI és a tripánkék eredmény összehasonlítása szállítás előtt és után.
A sejtek törésmutatója megváltozik, a Trypan Blue festés nem volt annyira szembetűnő, szállítás után nehéz meghatározni az életképességet.Míg a kétszínű fluoreszcencia lehetővé teszi az élő és elhalt sejtmaggal rendelkező sejtek megfestését, pontos életképességi eredményeket generál még törmelék, vérlemezkék és vörösvértestek jelenlétében is.
