Kísérleti Protokoll
A citotoxicitás %-át az alábbi egyenlettel számítjuk ki.
Citotoxicitás % = (a kontroll élő számai – a kezeltek élő számai) / a kontroll élő számai × 100
A céltumorsejteket nem toxikus, nem radioaktív calcein AM-mel jelölve vagy GFP-vel transzfektálva nyomon követhetjük a daganatsejtek CAR-T sejtek általi pusztulását.Míg az élő célráksejteket zöld kalcein AM vagy GFP jelöli, az elhalt sejtek nem tudják megtartani a zöld festéket.A Hoechst 33342-t minden sejt (T-sejtek és tumorsejtek) festésére használják, alternatívaként a céltumorsejteket membránhoz kötött calcein AM-mel, a PI-t pedig az elhalt sejtek (T-sejtek és tumorsejtek) festésére használják.Ez a festési stratégia lehetővé teszi a különböző sejtek megkülönböztetését.
E: T A K562 arányfüggő citotoxicitása
A példa Hoechst 33342, CFSE, PI fluoreszcens képek a K562 célsejtek t = 3 óránál
Az eredményül kapott fluoreszcens képek a Hoechst+CFSE+PI+ célsejtek növekedését mutatták az E:T arány növekedésével.
