Վերացական: Մեզենխիմալ ցողունային բջիջները պլյուրիպոտենտ ցողունային բջիջների ենթախումբ են, որոնք կարող են մեկուսացվել մեզոդերմայից:Իրենց ինքնավերարտադրման նորացման և բազմակողմանի տարբերակման բնութագրերով նրանք ունեն բժշկության մեջ տարբեր թերապիաների բարձր ներուժ:Մեզենխիմալ ցողունային բջիջներն ունեն յուրահատուկ իմունային ֆենոտիպ և իմունային կարգավորման ունակություն:Հետևաբար, մեզենխիմալ ցողունային բջիջներն արդեն լայնորեն կիրառվում են ցողունային բջիջների փոխպատվաստման, հյուսվածքների ճարտարագիտության և օրգանների փոխպատվաստման մեջ:Եվ այս հավելվածներից բացի, դրանք օգտագործվում են որպես հյուսվածքների ճարտարագիտության իդեալական գործիք՝ որպես սերմնացան բջիջներ մի շարք հիմնարար և կլինիկական հետազոտական փորձերի ժամանակ:Մինչ օրս մեզենխիմալ ցողունային բջիջների որակի վերահսկման լայնորեն ընդունված մեթոդ և չափանիշ գոյություն չունի։Countstar Rigel-ը կարող է վերահսկել կոնցենտրացիան, կենսունակությունը և ֆենոտիպային բնութագրերը (և դրանց փոփոխությունները) այս ցողունային բջիջների արտադրության և տարբերակման ընթացքում:Countstar Rigel-ն ունի նաև առավելություն՝ ստանալով լրացուցիչ մորֆոլոգիական տեղեկատվություն, որը տրամադրվում է մշտական պայծառ դաշտի և ֆլյուորեսցենցիայի վրա հիմնված պատկերի ձայնագրությունների միջոցով՝ բջջային որակի մոնիտորինգի ողջ գործընթացի ընթացքում:Countstar Rigel-ն առաջարկում է ցողունային բջիջների որակի վերահսկման արագ, բարդ և հուսալի մեթոդ:
Նյութեր եւ մեթոդներ:
Ադիպոսից ստացված մեզենխիմալ ցողունային բջիջները (AdMSCs) շնորհվել են պրոֆեսոր Նիանմին Ցիի կողմից, AO/PI ներկման լուծույթ (Shanghai RuiYu, CF002):Հակամարմիններ՝ CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company):
AdMSC-ները մշակվել են 37℃, 5% CO2 խոնավացված ինկուբատորում:Օգտագործելուց առաջ մարսել տրիպսինով:
CD-մարկերի ներկման ընթացակարգին հետևել են որպես հակամարմինների ձեռնարկ:
CD մարկերի հայտնաբերում Countstar Rigel-ի հետ.
1. Ազդանշանի գույնի կիրառման ընթացակարգ է ստեղծվել՝ PE ալիքը դնելով PE ֆլուորեսցենտի պատկերով:
2. Յուրաքանչյուր խցիկից գրավվել է 3 դաշտ։
3. Պատկերման և նախնական վերլուծության ավարտից հետո դրական և բացասական տրանսֆեկցիայի շեմը (log gate) սահմանվեց FCS ծրագրաշարով:
Ցողունային բջիջների որակի վերահսկում
Հետևյալ նկարը (Նկար 1) ցույց է տալիս ընթացակարգը ցողունային բջիջների թերապիա .
Նկար 1. Ցողունային բջիջներով թերապիայի ընթացակարգը
Արդյունքները:
AdMSC-ների կոնցենտրացիայի, կենսունակության, տրամագծի և ագրեգացման որոշում:
AdMSC-ների կենսունակությունը որոշվել է AO/PI-ով, ստեղծվել է երկգույն կիրառման ընթացակարգ՝ կարգավորելով Կանաչ ալիքը և Կարմիր ալիքը AO-ի և PI-ի ֆլուորեսցենտության պատկերին, գումարած պայծառ դաշտը:Պատկերների օրինակները ներկայացված են Նկար 2-ում:
Նկար 2. AdMSC-ների փոխադրումից առաջ և տեղափոխումից հետո պատկերներ:Ա. Տրանսպորտից առաջ;ցուցադրվում է ներկայացուցչական պատկեր:B. Փոխադրումից հետո;ցուցադրվում է ներկայացուցչական պատկեր:
AdMSC-ների կենսունակությունը կտրուկ փոխվել է փոխադրումից հետո, համեմատած նախորդ փոխադրման հետ:Կենսունակությունը մինչև տրանսպորտը կազմում էր 92%, իսկ փոխադրումից հետո այն նվազել է մինչև 71%:Արդյունքը ցույց է տրված Նկար 3-ում:
Նկար 3. AdMSC-ների կենսունակության արդյունքները (նախքան փոխադրումը և փոխադրումից հետո)
Տրամագիծը և ագրեգացիան որոշվել են նաև Քաունսթար Ռիգելի կողմից։AdMSC-ների տրամագիծը փոխադրումից հետո կտրուկ փոխվել է, համեմատած նախորդ փոխադրման հետ:Տրանսպորտից առաջ տրամագիծը 19 մկմ էր, բայց տեղափոխումից հետո այն ավելացավ մինչև 21 մկմ:Մինչև փոխադրումը կազմել է 20%, իսկ տեղափոխումից հետո աճել է մինչև 25%:Countstar Rigel-ի նկարահանած պատկերներից AdMSC-ների ֆենոտիպը կտրուկ փոխվել է փոխադրումից հետո:Արդյունքները ներկայացված են Նկար 4-ում:
Նկար 4. տրամագիծը և միավորման արդյունքները:A: AdMSC-ների ներկայացուցչական պատկերները, AdMSC-ների ֆենոտիպը փոխադրումից հետո կտրուկ փոխվել են:B: Տրանսպորտից առաջ ագրեգացումը կազմում էր 20%, բայց փոխադրումից հետո այն ավելացավ մինչև 25%:C. Տրամագիծը մինչև տեղափոխումը 19 մկմ էր, բայց տեղափոխումից հետո այն ավելացավ մինչև 21 մկմ:
Որոշեք AdMSC-ների իմունոֆենոտիպը Countstar Rigel-ի կողմից
AdMSC-ների իմունոֆենոտիպը որոշվել է Countstar Rigel-ի կողմից, AdMSC-ները ինկուբացվել են համապատասխանաբար տարբեր հակամարմիններով (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR):Ազդանշանի գույնի կիրառման ընթացակարգը ստեղծվել է՝ PE ֆլուորեսցենտը պատկերելու համար Կանաչ ալիք սահմանելով, ինչպես նաև պայծառ դաշտ:Պայծառ դաշտի նկարի հղման հատվածավորումը կիրառվել է որպես դիմակ՝ PE լյումինեսցենտային ազդանշանի նմուշառման համար:Ցուցադրվեցին CD105-ի արդյունքները (Նկար 5):
Նկար 5. AdMSC-ների CD105 արդյունքները որոշվել են Countstar Rigel-ի կողմից:A. CD105-ի դրական տոկոսի քանակական վերլուծություն տարբեր նմուշներում FCS Express 5 plus ծրագրաշարի միջոցով:B. Բարձրորակ պատկերները լրացուցիչ մորֆոլոգիական տեղեկատվություն են տալիս:C. Վավերացված արդյունքները յուրաքանչյուր բջջի մանրապատկերներով, FCS ծրագրային գործիքները բջիջները բաժանեցին տարբեր խմբերի՝ ըստ դրանց տարբեր սպիտակուցային արտահայտության:
Այլ հակամարմինների արդյունքները ցույց են տրված Նկար 6-ում
Նկար 6. Ա. ASC-ների ներկայացուցչական պատկեր՝ տիպիկ spindle-shaped morphology-ով:Լուսանկարվել է OLYMPUS մանրադիտակով:Բնօրինակ խոշորացում, (10x):B. ASC-ների ադիպոգենային տարբերակումը վկայում է ռութենիում կարմիր ներկումը, որը ցույց է տալիս հանքայնացման տարածքները:Լուսանկարվել է OLYMPUS մանրադիտակով:Բնօրինակ խոշորացում (10x):C. Countstar FL-ի ASC-ների բնութագրումը:
Ամփոփում:
Countstar FL-ը կարող է վերահսկել կոնցենտրացիան, կենսունակությունը և ֆենոտիպային բնութագրերը (և դրանց փոփոխությունները) այս ցողունային բջիջների արտադրության և տարբերակման ընթացքում:FCS Express-ը ապահովում է յուրաքանչյուր ազդանշանային բջիջը վերանայելու գործառույթը, պատկերի միջոցով տվյալների վավերացումը:Օգտագործողը կարող է նաև վստահություն ունենալ՝ հաջորդ փորձարկումներն իրականացնելու համար՝ հիմնված Countstar Rigel-ի արդյունքների վրա:Countstar Rigel-ն առաջարկում է ցողունային բջիջների որակի վերահսկման արագ, բարդ և հուսալի մեթոդ:
