Penghitungan fluoresensi ganda AOPI adalah jenis pengujian yang digunakan untuk mendeteksi konsentrasi dan viabilitas sel.Solusinya adalah kombinasi acridine orange (pewarnaan asam nukleat fluoresen hijau) dan propidium iodida (pewarnaan asam nukleat fluoresen merah).Propidium iodide (PI) adalah pewarna eksklusi membran yang hanya memasuki sel dengan membran terganggu, sedangkan acridine orange mampu menembus semua sel dalam suatu populasi.Ketika kedua pewarna hadir dalam nukleus, propidium iodida menyebabkan pengurangan fluoresensi jingga acridine oleh transfer energi resonansi fluoresensi (FRET).Akibatnya, sel berinti dengan membran utuh menodai hijau fluoresen dan dihitung sebagai hidup, sedangkan sel berinti dengan membran terganggu hanya menodai merah fluoresen dan dihitung mati saat menggunakan sistem Countstar® FL.Bahan tidak berinti seperti sel darah merah, trombosit, dan serpihan tidak berpendar dan diabaikan oleh perangkat lunak Countstar® FL.
Proses Terapi Sel Induk
Gambar 4 Pemantauan viabilitas dan jumlah sel sel punca mesenkim (MSC) untuk digunakan dalam terapi sel.
Tentukan viabilitas MSC dengan AO/PI dan uji Trypan Blue
Gambar 2. A. Gambar MSC diwarnai dengan AO/PI dan Trypan Blue;2. Perbandingan hasil AO/PI dan Trypan blue sebelum dan sesudah pengangkutan.
Perubahan indeks bias sel, pewarnaan Trypan Blue tidak begitu jelas, sulit untuk menentukan viabilitas setelah transportasi.Sementara fluoresensi dua warna memungkinkan pewarnaan sel berinti hidup dan mati, menghasilkan hasil viabilitas yang akurat bahkan di hadapan puing-puing, trombosit, dan sel darah merah.
