Protokol Eksperimental
% sitotoksisitas dihitung dengan persamaan di bawah ini.
Sitotoksisitas % = (Jumlah kontrol langsung – Hitungan langsung yang diobati) / Hitungan langsung kontrol × 100
Dengan melabeli sel tumor target dengan calcein AM non-toksik dan non-radioaktif atau transfeksi dengan GFP, kami dapat memantau pembunuhan sel tumor oleh sel CAR-T.Sementara sel-sel kanker target hidup akan diberi label oleh AM calcein hijau atau GFP, sel-sel mati tidak dapat mempertahankan pewarna hijau.Hoechst 33342 digunakan untuk pewarnaan semua sel (sel T dan sel tumor), sebagai alternatif, sel tumor target dapat diwarnai dengan kalsein AM terikat membran, PI digunakan untuk pewarnaan sel mati (sel T dan sel tumor).Strategi pewarnaan ini memungkinkan untuk membedakan sel yang berbeda.
E: Sitotoksisitas tergantung rasio T dari K562
Contoh gambar fluorescent Hoechst 33342, CFSE, PI adalah sel target K562 pada t = 3 jam
Gambar fluoresen yang dihasilkan menunjukkan peningkatan sel target Hoechst+CFSE+PI+ seiring dengan peningkatan rasio E:T
