Countstar kerfið sameinar frumumæli og frumuteljara í eitt hljóðfæri fyrir borðbekk.Þetta forritsknúna, fyrirferðarmikla og sjálfvirka frumumyndakerfi býður upp á allt-í-einn lausn fyrir krabbameinsfrumurannsóknir, þar á meðal frumutalningu, lífvænleika (AO/PI, trypan blue), frumufrumumyndun (Annexin V-FITC/PI), frumu hringrás (PI) og GFP/RFP transfection.
Ágrip
Krabbamein er ein helsta dánarorsök um allan heim og þróun nýrra krabbameinsmeðferðaraðferða skiptir miklu máli.Krabbameinsfrumur er grunnrannsóknarviðfang krabbameins, ýmsar upplýsingar þarf að meta úr krabbameinsfrumunni.Þetta rannsóknarsvæði þarfnast skjótrar, áreiðanlegrar, einfaldrar og nákvæmrar frumugreiningar.Countstar kerfið býður upp á einfaldan lausnarvettvang fyrir krabbameinsfrumugreiningu.
Rannsakaðu krabbameinsfrumuapoptosis eftir Countstar Rigel
Apoptosis mælingar eru reglulega notaðar á mörgum rannsóknarstofum í margvíslegum tilgangi, allt frá því að meta heilsu frumuræktunar til að meta eiturverkanir efnasambanda.
Apoptosis próf er gerð sem notuð er til að ákvarða apoptosis hlutfall frumna með Annexin V-FITC/PI litunaraðferð.Annexin V binst fosfatidýlseríni (PS) með frumu frumudauða eða drepfrumu.PI fer aðeins inn í drepandi/mjög seint stig apoptotic frumur.(Mynd 1)
A： Snemma frumuddreifingarviðauki V (+), PI (-)
B: Seint frumuddrun viðauka V (+), PI (+)
Mynd 1: Stækkuð smáatriði af Countstar Rigel myndum (5 x stækkun) af 293 frumum, meðhöndlaðir með Annexin V FITC og PI
Frumuhringsgreining á krabbameinsfrumum
Frumuhringurinn eða frumuskiptingarhringurinn er röð atburða sem eiga sér stað í frumu sem leiðir til skiptingar hennar og fjölföldunar á DNA hennar (DNA afritun) til að framleiða tvær dótturfrumur.Í frumum með kjarna, eins og í heilkjörnungum, er frumuhringnum einnig skipt í þrjú tímabil: millifasa, mítósu (M) fasa og frumumyndun.Própidíumjoðíð (PI) er kjarnalitunarefni sem er oft notað til að mæla frumuhringinn.Vegna þess að litarefnið kemst ekki inn í lifandi frumur eru frumurnar festar með etanóli fyrir litun.Allar frumurnar eru síðan litaðar.Frumur sem búa sig undir skiptingu munu innihalda vaxandi magn af DNA og sýna hlutfallslega aukna flúrljómun.Mismunur á styrkleika flúrljómunar er notaður til að ákvarða hlutfall frumna í hverjum áfanga frumuhringsins.Countstar getur tekið myndina og niðurstöður verða sýndar í FCS express hugbúnaðinum.(Mynd 2)
Mynd 2: MCF-7 (A) og 293T (B) voru lituð með frumuhringsgreiningarsetti með PI, niðurstöðurnar voru ákvarðaðar með Countstar Rigel og greindar með FCS express.
Ákvörðun lífvænleika og GFP transfektion í frumu
Meðan á lífferlinu stendur er GFP oft notað til að renna saman við raðbrigða prótein sem vísbendingu.Ákvarða GFP flúrljómun getur endurspeglað markprótein tjáningu.Countstar Rigel býður upp á hraðvirka og einfalda greiningu til að prófa GFP transfection sem og lífvænleika.Frumur voru litaðar með Propidium jodide (PI) og Hoechst 33342 til að skilgreina dauða frumuþýði og heildarfrumuþýði.Countstar Rigel býður upp á fljótlega, megindlega aðferð til að meta skilvirkni og hagkvæmni GFP tjáningar á sama tíma.(Mynd 4)
Mynd 4: Frumur eru staðsettar með því að nota Hoechst 33342 (blá) og auðvelt er að ákvarða hlutfall GFP-tjáandi frumna (grænt).Ólífvænlegar frumur eru litaðar með própídíumjoðíði (PI; rauðum).
Lífvænleiki og frumufjöldi
AO/PI Tvöfalt flúrljómunartalning er greiningargerðin sem notuð er til að greina frumustyrk, lífvænleika.Það skiptist í frumulínutalningu og frumfrumutalningu eftir mismunandi frumugerð.Lausnin inniheldur blöndu af grænflúrljómandi kjarnsýrulitnum, acridine appelsínugulum og rauðflúrljómandi kjarnsýrulitnum, própídínjoðíði.Própídínjoðíð er himnuútilokunarlitarefni sem fer aðeins inn í frumur með skerta himnur á meðan akridín appelsína kemst í gegnum allar frumur í þýði.Þegar báðir litarefnin eru til staðar í kjarnanum veldur própídínjoðíði minnkun á akridín appelsínuflúrljómun með flúrljómunarresonance energy transfer (FRET).Fyrir vikið litast kjarnafrumur með ósnortnar himnur flúrljómandi grænt og eru taldar lifandi, en kjarnafrumur með skerta himnur litast aðeins flúrljómandi rauðar og eru taldar dauðar þegar Countstar Rigel kerfið er notað.Kjarnalaust efni eins og rauð blóðkorn, blóðflögur og rusl flúrljóma ekki og er hunsað af Countstar Rigel hugbúnaðinum.(Mynd 5)
Mynd 5: Countstar hefur fínstillt litunaraðferð með tvíflúrljómun fyrir einfalda, nákvæma ákvörðun á styrk og lífvænleika PBMC.Hægt er að greina sýni lituð með AO/PI með Counstar Rigel
