תַקצִיר: תאי גזע מזנכימליים הם תת-קבוצה של תאי גזע פלוריפוטנטיים שניתן לבודד מהמזודרם.עם חידוש השכפול העצמי ומאפייני הבידול הרב-כיווני שלהם, יש להם פוטנציאל גבוה לטיפולים שונים ברפואה.לתאי גזע Mesenchymal יש פנוטיפ חיסוני ייחודי ויכולת ויסות חיסונית.לכן, תאי גזע מזנכימליים כבר נמצאים בשימוש נרחב בהשתלות תאי גזע, הנדסת רקמות והשתלת איברים.ומעבר ליישומים אלה, הם משמשים ככלי אידיאלי בהנדסת רקמות כתאי זריעה בסדרה של ניסויים מחקריים בסיסיים וקליניים.עד כה, אין שיטה ותקן מקובלים לבקרת איכות של תאי גזע מזנכימליים.ה-Countstar Rigel יכול לעקוב אחר הריכוז, הכדאיות ומאפייני הפנוטיפ (והשינויים שלהם) במהלך הייצור וההתמיינות של תאי גזע אלה.ל-Countstar Rigel יש גם יתרון בהשגת מידע מורפולוגי נוסף, המסופק על ידי הקלטות תמונה מבוססות שדה בהיר וקרינה קבועים במהלך כל התהליך של ניטור איכות התא.ה-Countstar Rigel מציע שיטה מהירה, מתוחכמת ואמינה לבקרת איכות של תאי גזע.
חומרים ושיטות:
תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן (AdMSCs) קיבלו במתנה פרופסור Nianmin Qi, תמיסת צביעה AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).נוגדנים: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs תורבו בחממה 37℃, 5% CO2 לחות.לעכל עם טריפסין לפני השימוש.
הליך צביעת סמן CD נמשך כמדריך של נוגדנים.
זיהוי סמן CD עם Countstar Rigel:
1. הליך יישום צבע אות נוצר על ידי הגדרת ערוץ PE לקרינת PE תמונה.
2. 3 שדות נתפסו מכל תא.
3. לאחר השלמת ההדמיה והניתוח הראשוני, הגדרת הסף (שער יומן) עבור טרנספקציה חיובית ושלילית נקבעה על ידי תוכנת FCS.
בקרת איכות של תאי גזע
האיור הבא (איור 1) מציג את ההליך של טיפול בתאי גזע .
איור 1: ההליך לטיפול בתאי גזע
תוצאות:
קביעת הריכוז, הכדאיות, הקוטר והצבירה של AdMSCs.
הכדאיות של AdMSCs נקבעה על ידי AO/PI, הליך יישום בצבע כפול נוצר על ידי הגדרת הערוץ הירוק והערוץ האדום לקרינת AO ו-PI, בתוספת שדה בהיר.תמונות לדוגמה הוצגו באיור 2.
איור 2. תמונות של לפני ההובלה ואחרי ההובלה של AdMSCs.א. לפני ההובלה;מוצגת תמונה מייצגת.ב. לאחר הובלה;מוצגת תמונה מייצגת.
הכדאיות של AdMSCs השתנתה באופן דרסטי לאחר ההובלה בהשוואה לקודם ההובלה.הכדאיות לפני ההובלה הייתה 92%, אך היא ירדה ל-71% לאחר ההובלה.התוצאה הוצגה באיור 3.
איור 3. תוצאות הכדאיות של AdMSCs (לפני ההובלה ואחרי ההובלה)
הקוטר והצבירה נקבעו גם על ידי Countstar Rigel.הקוטר של AdMSCs השתנה באופן דרסטי לאחר ההובלה בהשוואה לקודם ההובלה.הקוטר לפני ההובלה היה 19 מיקרומטר, אך הוא גדל ל-21 מיקרומטר לאחר ההובלה.הצבירה של לפני ההובלה הייתה 20%, אך היא גדלה ל-25% לאחר ההובלה.מהתמונות שצולמו על ידי Countstar Rigel, הפנוטיפ של AdMSCs השתנה באופן דרסטי לאחר ההובלה.התוצאות הוצגו באיור 4.
איור 4: תוצאות הקוטר והצבירה.ת: התמונות המייצגות של AdMSCs, הפנוטיפ של AdMSCs השתנו באופן דרסטי לאחר הובלה.ב: הצבירה לפני ההובלה הייתה 20%, אך היא גדלה ל-25% לאחר ההובלה.ג: הקוטר לפני ההובלה היה 19 מיקרומטר, אך הוא גדל ל-21 מיקרומטר לאחר ההובלה.
קבע את האימונופנוטיפ של AdMSCs על ידי Countstar Rigel
האימונוטיפ של AdMSCs נקבע על ידי Countstar Rigel, AdMSCs הודגרו עם נוגדנים שונים בהתאמה (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).הליך יישום צבע אות נוצר על ידי הגדרת ערוץ ירוק לדימוי קרינת PE, בתוספת שדה בהיר.פילוח ייחוס תמונה של שדה בהיר הוחל כמסכה לדגימת אות הקרינה PE.התוצאות של CD105 הוצגו (איור 5).
איור 5: תוצאות CD105 של AdMSCs נקבעו על ידי Countstar Rigel.ת: ניתוח כמותי של האחוז החיובי של CD105 בדגימות שונות על ידי תוכנת FCS express 5 פלוס.ב: תמונות באיכות גבוהה מספקות מידע מורפולוגי נוסף.C: תוצאות מאומתות על ידי תמונות ממוזערות של כל תא בודד, כלי התוכנה של FCS חילקו את התאים לקבוצות שונות בהתאם לביטוי החלבון המשתנה שלהם.
תוצאות נוגדנים אחרות הוצגו באיור 6
איור 6: ת: תמונה מייצגת של ASCs עם מורפולוגיה טיפוסית בצורת ציר.נתפס במיקרוסקופ OLYMPUS.הגדלה מקורית, (10x).ב: בידול אדיפוגני של ASCs הוא עדות על ידי צביעה Ruthenium Red המראה אזורים של מינרליזציה.נתפס במיקרוסקופ OLYMPUS.הגדלה מקורית (פי 10).C: אפיון Countstar FL של ASCs.
סיכום:
ה-Countstar FL יכול לעקוב אחר הריכוז, הכדאיות ומאפייני הפנוטיפ (והשינויים שלהם) במהלך הייצור וההתמיינות של תאי גזע אלו.FCS express מספק את הפונקציה לסקור כל תא אות, לאמת את הנתונים דרך התמונה.המשתמש יכול גם לקבל את הביטחון לבצע את הניסויים הבאים על סמך תוצאות Countstar Rigel.ה-Countstar Rigel מציע שיטה מהירה, מתוחכמת ואמינה לבקרת איכות של תאי גזע.
