概要： 間葉系幹細胞は、中胚葉から分離できる多能性幹細胞のサブセットです。自己複製の更新と多方向の分化特性により、医学におけるさまざまな治療法の可能性が高くなっています。間葉系幹細胞は、独特の免疫表現型と免疫調節能力を持っています。したがって、間葉系幹細胞は、幹細胞移植、組織工学、および臓器移植ですでに広く使用されています。そして、これらのアプリケーションを超えて、それらは一連の基礎および臨床研究実験におけるシーダー細胞として組織工学の理想的なツールとして使用されます。これまで、間葉系幹細胞の品質管理のための広く受け入れられている方法と標準はありません。は、これらの幹細胞の産生および分化中に、濃度、生存率、表現型の特性（およびそれらの変化）を監視できます。は、細胞品質モニタリングの全プロセス中に永続的な明視野および蛍光ベースの画像記録によって提供される追加の形態学的情報を取得するという利点もあります。は、幹細胞の品質管理のための高速で洗練された信頼性の高い方法を提供します。
材料および方法：
脂肪由来間葉系幹細胞（AdMSC）は、AO / PI染色液（Shanghai RuiYu、CF002）のNianminQi教授から贈与されました。抗体：CD29、CD34、CD45、CD56、CD73、CD105、HLADR（BDCompany）。
AdMSCは37℃、5％CO2加湿インキュベーターで培養されました。使用前にトリプシンで消化してください。
抗体のマニュアルとしてCDマーカー染色手順に従った。
Countstar RigelによるCDマーカーの検出：
1. PE蛍光を画像化するようにPEチャネルを設定することにより、シグナルカラーの適用手順を作成しました。
2.各チャンバーから3つのフィールドがキャプチャされました。
3.イメージングと初期分析が完了した後、ポジティブおよびネガティブトランスフェクションのしきい値（ログゲート）設定をFCSソフトウェアで設定しました。
幹細胞の品質管理
次の図（図1）は、 幹細胞治療 。
図1：幹細胞治療の手順
結果：
AdMSCの濃度、生存率、直径、および凝集を決定します。
AdMSCの実行可能性は、AO / PIによって決定されました。2色のアプリケーション手順は、AOとPIの蛍光、および明視野を画像化するために緑チャネルと赤チャネルを設定することによって作成されました。画像の例を図2に示しました。
図2.AdMSCの輸送前と輸送後の画像。A.輸送前。代表的な画像を示します。B.輸送後;代表的な画像を示します。
AdMSCの実行可能性は、輸送前と比較した場合、輸送後に大幅に変化しました。輸送前の生存率は92％でしたが、輸送後は71％に低下しました。結果を図3に示しました。
図3.AdMSCの実行可能性の結果（輸送前および輸送後）
直径と凝集もによって決定されました。AdMSCの直径は、輸送前と比較して輸送後に大幅に変化しました。輸送前の直径は19μmでしたが、輸送後は21μmに増加しました。輸送前の集計は20％でしたが、輸送後は25％に増加しました。が撮影した画像から、AdMSCの表現型は輸送後に大幅に変化しました。結果を図4に示しました。
図4：直径と集計の結果。A：AdMSCの代表的な画像であるAdMSCの表現型は、輸送後に大幅に変化しました。B：輸送前の集計は20％でしたが、輸送後は25％に増加しました。C：輸送前の直径は19μmでしたが、輸送後は21μmに増加しました。
CountstarRigelによるCountstar Rigelの免疫表現型の決定
AdMSCの免疫表現型はCountstarRigelによって決定され、 はそれぞれ異なる抗体（CD29、CD34、CD45、CD56、CD73、CD105、HLA-DR）とインキュベートされました。シグナルカラーの適用手順は、PE蛍光と明視野を画像化するためにグリーンチャネルを設定することによって作成されました。明視野画像参照セグメンテーションは、PE蛍光シグナルをサンプリングするためのマスクとして適用されました。CD105の結果を示しました（図5）。
図5：AdMSCのCD105の結果は、 によって決定されました。A：FCS express5plusソフトウェアによるさまざまなサンプルのCD105の陽性率の定量分析。B：高品質の画像は、追加の形態学的情報を提供します。C：すべての単一細胞のサムネイルによって検証された結果、FCSソフトウェアツールは、さまざまなタンパク質発現に従って細胞を異なるグループに分割しました。
その他の抗体の結果を図6に示しました。
図6：A：典型的な紡錘形の形態を持つASCの代表的な画像。OLYMPUS顕微鏡で撮影。元の倍率、（10倍）。B：ASCの脂肪生成分化は、石灰化の領域を示すルテニウムレッド染色によって証明されます。OLYMPUS顕微鏡で撮影。元の倍率（10倍）。C：ASCのの特性評価。
概要：
Countstar FLは、これらの幹細胞の産生および分化中に、濃度、生存率、および表現型の特性（およびそれらの変化）を監視できます。FCS Expressは、すべての信号セルを確認し、画像を介してデータを検証する機能を提供します。ユーザーは、 の結果に基づいて次の実験を実行する自信を持つこともできます。は、幹細胞の品質管理のための高速で洗練された信頼性の高い方法を提供します。
