全血中の白血球の分析は、臨床検査室または血液銀行での日常的な分析です。白血球の濃度と生存率は、血液貯蔵の品質管理として重要な指標です。白血球とは別に、全血には多数の血小板、赤血球、または細胞破片が含まれているため、顕微鏡や明視野細胞カウンターで全血を直接分析することはできません。白血球をカウントする従来の方法は、時間がかかるRBC溶解プロセスを伴います。
AOPIデュアル蛍光カウントは、細胞濃度と生存率を検出するために使用されるアッセイタイプです。解決策は、アクリジンオレンジ（緑色蛍光核酸染色）とヨウ化プロピジウム（赤色蛍光核酸染色）の組み合わせです。ヨウ化プロピジウム（PI）は、膜が損傷した細胞にのみ入る膜排除色素ですが、アクリジンオレンジは集団内のすべての細胞に浸透することができます。両方の色素が核内に存在する場合、ヨウ化プロピジウムは、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）によってアクリジンオレンジの蛍光を減少させます。その結果、無傷の膜を持つ有核細胞は蛍光緑色に染色され、生きているものとしてカウントされますが、膜が損なわれた有核細胞は蛍光赤色のみを染色し、 システムを使用すると死んだものとしてカウントされます。
Countstar Rigelは、多くの複雑な細胞集団の特性評価アッセイに理想的なソリューションであり、全血中の白血球を迅速に分析することができます。
実験手順：
1. 20 µlの血液サンプルを採取し、180 µlのPBSでサンプルを希釈します。
2. 12µlのAO / PI溶液を12µlのサンプルに加え、ピペットで穏やかに混合します。
3. 20µlの混合物をチャンバースライドに引き込みます。
4.細胞をチャンバー内に約1分間静置させます。
5.スライドをCountstar機器に挿入します。
6.「AO/PI生存率」アッセイを選択し、このサンプルのサンプルIDを入力します。
7. [希釈率]、[セルタイプ]を選択し、[実行]をクリックしてテストを開始します。
注意：AOとPIは発がん性の可能性があります。皮膚や目に直接触れないように、オペレーターは個人用保護具（PPE）を着用することをお勧めします。
結果：
1.全血の明視野画像
全血の明視野画像では、赤血球の中にWBCは見えません。（図1）
図1全血の明視野画像。
2.全血の蛍光画像
AOとPI色素は、どちらも細胞の細胞核のDNAを染色します。したがって、血小板、赤血球、または細胞破片は、白血球の濃度と生存率の結果に影響を与えることができません。生きている白血球（緑）と死んだ白血球（赤）は、蛍光画像で簡単に視覚化できます。（図2）
図2全血の蛍光画像。（A）。AOチャネルの画像。（B）PIチャネルの画像。（C）AOとPIチャネルの画像をマージします。
3.白血球の濃度と生存率
FLソフトウェアは、3つのチャンバーセクションの細胞を自動的にカウントし、総WBC細胞数（1202）、濃度（1.83 x106細胞/ml）、および生存率（82.04％）の平均値を計算します。全血の画像とデータは、追加の分析やデータのアーカイブのためにPDF、画像、またはExcelとして簡単にエクスポートできます。
図Countstar Rigelソフトウェアのスクリーンショット
