Abstrak: Sèl induk mesenchymal minangka subset saka sel punca pluripoten sing bisa diisolasi saka mesoderm.Kanthi pembaharuan replikasi dhewe lan karakteristik diferensiasi multi-arah, dheweke duwe potensial dhuwur kanggo macem-macem terapi ing obat.Sel stem mesenchymal duwe fenotipe kekebalan sing unik lan kemampuan regulasi kekebalan.Mula, sel induk mesenchymal wis akeh digunakake ing transplantasi sel induk, rekayasa jaringan, lan transplantasi organ.Lan Ngluwihi aplikasi kasebut, digunakake minangka alat sing cocog ing teknik jaringan minangka sel seeder ing seri eksperimen riset dhasar lan klinis.Nganti saiki, ora ana cara lan standar sing ditampa sacara umum kanggo kontrol kualitas sel induk mesenchymal.Countstar Rigel bisa ngawasi konsentrasi, viabilitas, lan karakteristik fenotipe (lan owah-owahane) sajrone produksi lan diferensiasi sel induk kasebut.Countstar Rigel uga nduweni kaluwihan kanggo entuk informasi morfologis tambahan, sing diwenehake dening rekaman gambar sing padhang lan basis fluoresensi permanen sajrone proses pemantauan kualitas sel.Countstar Rigel nawakake cara sing cepet, canggih, lan dipercaya kanggo ngontrol kualitas sel induk.
Bahan lan metode:
Sel induk mesenchymal sing asale saka adipose (AdMSCs) diwenehi hadiah dening Profesor Nianmin Qi, larutan pewarnaan AO / PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antibodi: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs dibudidaya ing 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Digest karo trypsin sadurunge digunakake.
Prosedur pewarnaan CD marker ditindakake minangka manual antibodi.
Deteksi marker CD nganggo Countstar Rigel:
1. Prosedur aplikasi werna sinyal digawe kanthi nyetel saluran PE kanggo gambar PE fluoresensi.
2. 3 lapangan dijupuk saka saben kamar.
3. Sawise pencitraan lan analisis awal rampung, setelan ambang (gate log) kanggo transfeksi positif lan negatif disetel dening piranti lunak FCS.
Kontrol kualitas sel induk
Gambar ing ngisor iki (Gambar 1) nuduhake prosedur saka terapi sel punca .
Gambar 1: Prosedur kanggo terapi sel induk
Asil:
Nemtokake konsentrasi, viabilitas, diameter, lan agregasi AdMSC.
Kelangsungan AdMSC ditemtokake dening AO / PI, Prosedur aplikasi dual-werna digawe kanthi nyetel saluran Ijo lan saluran Abang kanggo gambar fluoresensi AO lan PI, ditambah karo lapangan sing padhang.Conto gambar ditampilake ing Gambar 2.
Gambar 2. Gambar sadurunge transportasi lan sawise transportasi AdMSCs.A. Sadurunge transportasi;gambar wakil ditampilake.B. Sawise transportasi;gambar wakil ditampilake.
Daya tahan AdMSC diganti drastis sawise transportasi yen dibandhingake sadurunge transportasi.Daya urip sadurunge transportasi yaiku 92%, nanging suda dadi 71% sawise transportasi.Asil ditampilake ing Gambar 3.
Gambar 3. Asil viabilitas AdMSCs (Sadurunge transportasi lan sawise transportasi)
Dhiameter lan agregasi uga ditemtokake dening Countstar Rigel.Dhiameter AdMSC diganti drastis sawise transportasi yen dibandhingake sadurunge transportasi.Dhiameter sadurunge diangkut yaiku 19μm, nanging mundhak dadi 21μm sawise transportasi.Agregasi sadurunge transportasi yaiku 20%, nanging mundhak dadi 25% sawise transportasi.Saka gambar sing dijupuk dening Countstar Rigel, fenotipe AdMSC diganti kanthi drastis sawise transportasi.Asil ditampilake ing Gambar 4.
Gambar 4: Dhiameter lan asil panggabungan.A: Gambar perwakilan AdMSC, fenotipe AdMSC diganti drastis sawise transportasi.B: Agregasi sadurunge transportasi yaiku 20%, nanging mundhak dadi 25% sawise transportasi.C: Dhiameter sadurunge diangkut yaiku 19μm, nanging mundhak dadi 21μm sawise transportasi.
Nemtokake immunophenotype AdMSCs dening Countstar Rigel
Imunofenotip AdMSCs ditemtokake dening Countstar Rigel, AdMSCs diinkubasi kanthi antibodi sing beda (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Prosedur aplikasi werna sinyal digawe kanthi nyetel saluran Ijo kanggo gambar PE fluoresensi, plus lapangan padhang.Segmen referensi gambar lapangan padhang ditrapake minangka topeng kanggo sampel sinyal fluoresensi PE.Asil CD105 ditampilake (Gambar 5).
Gambar 5: asil CD105 AdMSCs ditemtokake dening Countstar Rigel.A: Analisis kuantitatif persentase positif CD105 ing macem-macem conto dening piranti lunak FCS express 5 plus.B: Gambar kualitas dhuwur nyedhiyakake informasi morfologis tambahan.C: Asil sing divalidasi kanthi gambar cilik saben sel, piranti lunak FCS mbagi sel kasebut dadi klompok sing beda-beda miturut ekspresi protein sing beda-beda.
Asil antibodi liyane ditampilake ing Fig 6
Gambar 6: A: Gambar perwakilan saka ASC kanthi morfologi berbentuk spindle khas.Ditangkep nganggo mikroskop OLYMPUS.Perbesaran asli, (10x).B: Diferensiasi adipogenik saka ASC dibuktekake kanthi pewarnaan Ruthenium Red sing nuduhake area mineralisasi.Ditangkep nganggo mikroskop OLYMPUS.Pembesaran asli (10x).C: Karakterisasi Countstar FL saka ASC.
Ringkesan:
Countstar FL bisa ngawasi konsentrasi, viabilitas, lan karakteristik fenotipe (lan owah-owahan) sajrone produksi lan diferensiasi sel induk kasebut.FCS express nyedhiyakake fungsi kanggo mriksa saben sel sinyal, validasi data liwat gambar.Pangguna uga bisa duwe kapercayan kanggo nindakake eksperimen sabanjure adhedhasar asil Countstar Rigel.Countstar Rigel nawakake cara sing cepet, canggih, lan dipercaya kanggo ngontrol kualitas sel induk.
