Analisis leukosit ing getih wutuh minangka tes rutin ing laboratorium klinis utawa bank getih.Konsentrasi lan viabilitas leukosit minangka indeks penting minangka kontrol kualitas panyimpenan getih.Kajaba saka leukosit, getih wutuh ngemot akeh trombosit, sel getih abang, utawa puing-puing seluler, sing ndadekake ora bisa nganalisa getih wutuh langsung ing mikroskop utawa counter sel lapangan sing cerah.Cara konvensional kanggo ngetung sel getih putih kalebu proses lisis RBC, sing mbutuhake wektu.
AOPI Dual-fluoresces counting minangka jinis assay sing digunakake kanggo ndeteksi konsentrasi lan daya tahan sel.Solusi kasebut yaiku kombinasi oranye acridine (noda asam nukleat fluoresensi ijo) lan propidium iodide (noda asam nukleat neon abang).Propidium iodide (PI) minangka pewarna eksklusi membran sing mung mlebu ing sel kanthi membran sing rusak, dene oranye acridine bisa nembus kabeh sel ing sawijining populasi.Nalika loro pewarna kasebut ana ing inti, propidium iodide nyebabake nyuda fluoresensi oranye acridine kanthi transfer energi resonansi fluoresensi (FRET).Akibaté, sel nukleus karo membran utuh noda ijo neon lan dianggep minangka urip, dene sel nukleus kanthi membran sing rusak mung noda abang neon lan dianggep mati nalika nggunakake sistem Countstar® Rigel.
Countstar Rigel minangka solusi sing cocog kanggo akeh tes karakterisasi populasi sel sing kompleks, supaya bisa nganalisa sel getih putih kanthi cepet ing getih.
Prosedur Eksperimental:
1. Ambil 20 µl sampel darah dan encerkan sampel tersebut dalam 180 µl PBS.
2. Tambah 12μl AO/PI solusi menyang 12μl sampel, alon-alon dicampur karo pipette;
3. Tarik campuran 20µl menyang slide kamar;
4.Allow sel kanggo dumunung ing kamar kanggo watara 1 menit;
5. Serangga geser menyang instrumen Countstar FL;
6. Pilih tes "AO / PI Viability", banjur Ketik ID Sample kanggo sampel iki.
7. Pilih rasio pengenceran, Tipe Sel, klik 'Run' kanggo miwiti tes.
Ati-ati: AO lan PI minangka karsinogen potensial.Disaranake operator nganggo peralatan pelindung pribadi (PPE) supaya ora kena langsung karo kulit lan mata.
asil:
1. Padhang Field Gambar saka kabèh getih
Ing gambar lapangan padhang saka kabèh getih, WBC ora katon ing antarane sel getih abang.(Gambar 1)
Gambar 1 Gambar lapangan padhang getih wutuh.
2. Fluoresensi Gambar saka kabèh getih
Pewarna AO lan PI minangka pewarna DNA ing inti sel sel.Mulane, Platelet, sel getih abang, utawa lebu sel ora bisa mengaruhi konsentrasi leukosit lan asil viabilitas.Leukosit urip (Ijo) lan leukosit mati (Abang) gampang digambarake ing gambar fluoresensi.(Gambar 2)
Gambar 2 Gambar Fluoresensi getih wutuh.(A).Gambar AO Channel;(B) Gambar Saluran PI;(C) Gabung gambar saka AO lan PI Channel.
3. Konsentrasi lan viabilitas leukosit
Piranti lunak Countstar FL kanthi otomatis ngetung sel saka telung bagean kamar lan ngetung nilai rata-rata saka total jumlah sel WBC (1202), konsentrasi (1,83 x 106 sel/ml), lan% daya tahan (82,04%).Gambar lan data getih kabeh bisa gampang diekspor minangka PDF, Gambar utawa Excel kanggo analisis tambahan utawa pengarsipan data.
Gambar 3 Screenshot saka Countstar Rigel Software
