Countstar სისტემა აერთიანებს გამოსახულების ციტომეტრს და უჯრედების მრიცხველს ერთ სკამზე ზედა ინსტრუმენტად.ეს აპლიკაციაზე ორიენტირებული, კომპაქტური და ავტომატიზირებული უჯრედების ვიზუალიზაციის სისტემა უზრუნველყოფს ერთ-ერთ გადაწყვეტას კიბოს უჯრედების კვლევისთვის, მათ შორის უჯრედების დათვლის, სიცოცხლისუნარიანობის (AO/PI, ტრიპან ლურჯი), აპოპტოზის (Annexin V-FITC/PI), უჯრედების ჩათვლით. ციკლი (PI) და GFP/RFP ტრანსფექცია.
Აბსტრაქტული
კიბო მსოფლიოში სიკვდილის ერთ-ერთი მთავარი მიზეზია და კიბოს მკურნალობის ახალი მეთოდების შემუშავებას დიდი მნიშვნელობა აქვს.კიბოს უჯრედი არის კიბოს ძირითადი კვლევის ობიექტი, საჭიროა სხვადასხვა ინფორმაციის შეფასება კიბოს უჯრედიდან.ამ კვლევის სფეროს სჭირდება უჯრედების სწრაფი, საიმედო, მარტივი და დეტალური ანალიზი.Countstar სისტემა უზრუნველყოფს მარტივი გადაწყვეტის პლატფორმას კიბოს უჯრედების ანალიზისთვის.
კიბოს უჯრედების აპოპტოზის შესწავლა Countstar Rigel-ის მიერ
აპოპტოზის ანალიზები რეგულარულად გამოიყენება მრავალ ლაბორატორიაში მრავალფეროვანი მიზნებისთვის, უჯრედული კულტურების ჯანმრთელობის შეფასებიდან ნაერთების პანელის ტოქსიკურობის შეფასებამდე.
აპოპტოზის ანალიზი არის ტიპი, რომელიც გამოიყენება უჯრედების აპოპტოზის პროცენტის დასადგენად Annexin V-FITC/PI შეღებვის მეთოდით.ანექსინი V უკავშირდება ფოსფატიდილსერინს (PS) ადრეული აპოპტოზის უჯრედთან ან ნეკროზის უჯრედთან.PI მხოლოდ ნეკროზულ/ძალიან გვიან სტადიის აპოპტოზურ უჯრედებში შედის.(Ფიგურა 1)
A: ადრეული აპოპტოზი ანექსინი V (+), PI (-)
B: გვიანი აპოპტოზი ანექსინი V (+), PI (+)
სურათი 1: Countstar Rigel სურათების გაფართოებული დეტალები (5x გადიდება) 293 უჯრედის, დამუშავებული Annexin V FITC და PI
კიბოს უჯრედის უჯრედული ციკლის ანალიზი
უჯრედის ციკლი ან უჯრედის გაყოფის ციკლი არის მოვლენათა სერია, რომელიც ხდება უჯრედში, რაც იწვევს მის გაყოფას და მისი დნმ-ის დუბლირებას (დნმ-ის რეპლიკაცია) ორი ქალიშვილი უჯრედის წარმოქმნით.ბირთვის მქონე უჯრედებში, ისევე როგორც ევკარიოტებში, უჯრედული ციკლი ასევე იყოფა სამ პერიოდად: ინტერფაზა, მიტოზური (M) ფაზა და ციტოკინეზი.პროპიდიუმის იოდიდი (PI) არის ბირთვული შეღებვის საღებავი, რომელიც ხშირად გამოიყენება უჯრედული ციკლის გასაზომად.იმის გამო, რომ საღებავი ცოცხალ უჯრედებში ვერ მოხვდება, შეღებვამდე უჯრედები ფიქსირდება ეთანოლით.შემდეგ ყველა უჯრედი შეღებილია.გაყოფისთვის მომზადებული უჯრედები შეიცავენ დნმ-ის მზარდ რაოდენობას და აჩვენებენ პროპორციულად გაზრდილ ფლუორესცენციას.ფლუორესცენციის ინტენსივობის განსხვავებები გამოიყენება უჯრედების ციკლის თითოეულ ფაზაში უჯრედების პროცენტის დასადგენად.Countstar-ს შეუძლია სურათის გადაღება და შედეგები გამოჩნდება FCS Express პროგრამულ უზრუნველყოფაში.(სურათი 2)
სურათი 2: MCF-7 (A) და 293T (B) შეღებილი იქნა უჯრედული ციკლის გამოვლენის ნაკრებით PI-ით, შედეგები განისაზღვრა Countstar Rigel-ის მიერ და გაანალიზდა FCS Express-ით.
სიცოცხლისუნარიანობა და GFP ტრანსფექციის განსაზღვრა უჯრედში
ბიოპროცესის დროს GFP ხშირად გამოიყენება რეკომბინანტულ პროტეინთან შესარწყლად, როგორც ინდიკატორი.განსაზღვრეთ GFP ფლუორესცენტური შეიძლება აისახოს სამიზნე ცილის გამოხატულება.Countstar Rigel გთავაზობთ სწრაფ და მარტივ ანალიზს GFP ტრანსფექციისა და სიცოცხლისუნარიანობის შესამოწმებლად.უჯრედები შეღებილი იყო პროპიდიუმის იოდიდით (PI) და Hoechst 33342 მკვდარი უჯრედების პოპულაციისა და მთლიანი უჯრედების პოპულაციის დასადგენად.Countstar Rigel გთავაზობთ სწრაფ, რაოდენობრივ მეთოდს GFP გამოხატვის ეფექტურობისა და სიცოცხლისუნარიანობის შესაფასებლად ერთდროულად.(სურათი 4)
სურათი 4: უჯრედები განლაგებულია Hoechst 33342 (ლურჯი) გამოყენებით და GFP გამოხატული უჯრედების პროცენტი (მწვანე) ადვილად შეიძლება განისაზღვროს.არასიცოცხლისუნარიანი უჯრედი შეღებილია პროპიდიუმის იოდიდით (PI; წითელი).
სიცოცხლისუნარიანობა და უჯრედების რაოდენობა
AO/PI ორმაგი ფლუორესცის დათვლა არის კვლევის ტიპი, რომელიც გამოიყენება უჯრედის კონცენტრაციის, სიცოცხლისუნარიანობის დასადგენად.იგი იყოფა უჯრედის ხაზების დათვლად და პირველადი უჯრედების დათვლად სხვადასხვა უჯრედის ტიპის მიხედვით.ხსნარი შეიცავს მწვანე-ფლუორესცენტული ნუკლეინის მჟავას ლაქის, აკრიდინის ფორთოხლის და წითელფლუორესცენტული ნუკლეინის მჟავას ლაქის, პროპიდიუმის იოდიდის კომბინაციას.პროპიდიუმის იოდიდი არის მემბრანის გამომრიცხავი საღებავი, რომელიც შედის მხოლოდ დაზიანებული მემბრანების მქონე უჯრედებში, ხოლო აკრიდინის ფორთოხალი აღწევს პოპულაციის ყველა უჯრედში.როდესაც ორივე საღებავი იმყოფება ბირთვში, პროპიდიუმის იოდიდი იწვევს აკრიდინის ფორთოხლის ფლუორესცენტის შემცირებას ფლუორესცენტული რეზონანსული ენერგიის გადაცემით (FRET).შედეგად, დაუზიანებელი მემბრანით ბირთვული უჯრედები ღებავს ფლუორესცენტულ მწვანეს და ითვლება ცოცხალად, ხოლო ბირთვული უჯრედები დაზიანებული მემბრანებით მხოლოდ ფლუორესცენტულ წითელ ფერს ღებავს და ითვლება მკვდრად Countstar Rigel სისტემის გამოყენებისას.არაბირთვიანი მასალა, როგორიცაა სისხლის წითელი უჯრედები, თრომბოციტები და ნამსხვრევები, არ ფლუორესცირდება და იგნორირებულია Countstar Rigel პროგრამული უზრუნველყოფის მიერ.(სურათი 5)
სურათი 5: Countstar-მა გააუმჯობესა ორმაგი ფლუორესცენტური შეღებვის მეთოდი PBMC კონცენტრაციისა და სიცოცხლისუნარიანობის მარტივი, ზუსტი განსაზღვრისთვის.AO/PI-ით შეღებილი ნიმუშები შეიძლება გაანალიზდეს Counstar Rigel-ით
