Აბსტრაქტული: მეზენქიმული ღეროვანი უჯრედები არის პლურიპოტენტური ღეროვანი უჯრედების ქვეჯგუფი, რომელიც შეიძლება იზოლირებული იყოს მეზოდერმიდან.მათი თვითრეპლიკაციის განახლებისა და მრავალმიმართულების დიფერენციაციის მახასიათებლებით, მათ აქვთ მედიცინაში სხვადასხვა თერაპიის მაღალი პოტენციალი.მეზენქიმურ ღეროვან უჯრედებს აქვთ უნიკალური იმუნური ფენოტიპი და იმუნური რეგულირების უნარი.ამიტომ, მეზენქიმული ღეროვანი უჯრედები უკვე ფართოდ გამოიყენება ღეროვანი უჯრედების ტრანსპლანტაციაში, ქსოვილის ინჟინერიაში და ორგანოთა ტრანსპლანტაციაში.და ამ აპლიკაციების მიღმა, ისინი გამოიყენება როგორც იდეალური ინსტრუმენტი ქსოვილის ინჟინერიაში, როგორც სათესლე უჯრედები ძირითადი და კლინიკური კვლევის ექსპერიმენტების სერიაში.დღემდე არ არსებობს მეზენქიმული ღეროვანი უჯრედების ხარისხის კონტროლის ფართოდ მიღებული მეთოდი და სტანდარტი.Countstar Rigel-ს შეუძლია აკონტროლოს კონცენტრაცია, სიცოცხლისუნარიანობა და ფენოტიპური მახასიათებლები (და მათი ცვლილებები) ამ ღეროვანი უჯრედების წარმოებისა და დიფერენციაციის დროს.Countstar Rigel-ს ასევე აქვს უპირატესობა დამატებითი მორფოლოგიური ინფორმაციის მოპოვებაში, რომელიც უზრუნველყოფილია მუდმივი ნათელი ველის და ფლუორესცენციის საფუძველზე გამოსახულების ჩანაწერებით უჯრედის ხარისხის მონიტორინგის მთელი პროცესის განმავლობაში.Countstar Rigel გთავაზობთ სწრაფ, დახვეწილ და საიმედო მეთოდს ღეროვანი უჯრედების ხარისხის კონტროლისთვის.
Მატერიალები და მეთოდები:
ცხიმოვანი ქსოვილისგან მიღებული მეზენქიმული ღეროვანი უჯრედები (AdMSCs) გადაეცა პროფესორმა ნიანმინ Qi-მ, AO/PI შეღებვის ხსნარი (Shanghai RuiYu, CF002).ანტისხეულები: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC კულტივირებული იყო 37℃, 5% CO2 დატენიანებულ ინკუბატორში.გამოყენებამდე შეიზილეთ ტრიპსინთან ერთად.
CD მარკერის შეღებვის პროცედურას მიჰყვებოდა ანტისხეულების სახელმძღვანელოს სახით.
CD მარკერის ამოცნობა Countstar Rigel-ით:
1. სიგნალის ფერის გამოყენების პროცედურა შეიქმნა PE არხის PE ფლუორესცენციის გამოსახულებაზე დაყენებით.
2. თითოეული პალატიდან დაიჭირეს 3 ველი.
3. გამოსახულების და პირველადი ანალიზის დასრულების შემდეგ, ბარიერი (log gate) დადებითი და უარყოფითი ტრანსფექციისთვის დაყენებული იქნა FCS პროგრამული უზრუნველყოფის საშუალებით.
ღეროვანი უჯრედების ხარისხის კონტროლი
შემდეგი სურათი (სურათი 1) გვიჩვენებს პროცედურას ღეროვანი უჯრედების თერაპია .
სურათი 1: ღეროვანი უჯრედებით თერაპიის პროცედურა
შედეგები:
AdMSC-ების კონცენტრაციის, სიცოცხლისუნარიანობის, დიამეტრისა და აგრეგაციის განსაზღვრა.
AdMSC-ების სიცოცხლისუნარიანობა განისაზღვრა AO/PI-ით, შეიქმნა ორმაგი ფერის განაცხადის პროცედურა მწვანე არხის და წითელი არხის დაყენებით AO და PI ფლუორესცენციის გამოსახულებაზე, პლუს კაშკაშა ველით.სურათების მაგალითები ნაჩვენებია სურათზე 2.
სურათი 2. AdMSC-ების ტრანსპორტირებამდე და ტრანსპორტირების შემდეგ სურათები.ა. ტრანსპორტირებამდე;ნაჩვენებია წარმომადგენლობითი სურათი.ბ. ტრანსპორტირების შემდეგ;ნაჩვენებია წარმომადგენლობითი სურათი.
AdMSC-ების სიცოცხლისუნარიანობა მკვეთრად შეიცვალა ტრანსპორტირების შემდეგ, ვიდრე ტრანსპორტირებამდე.სიცოცხლისუნარიანობა ტრანსპორტირებამდე იყო 92%, მაგრამ ტრანსპორტირების შემდეგ 71%-მდე შემცირდა.შედეგი ნაჩვენები იყო სურათზე 3.
სურათი 3. AdMSC-ების სიცოცხლისუნარიანობის შედეგები (ტრანსპორტამდე და ტრანსპორტირების შემდეგ)
დიამეტრი და აგრეგაცია ასევე განისაზღვრა Countstar Rigel-ის მიერ.AdMSC-ების დიამეტრი მკვეთრად შეიცვალა ტრანსპორტირების შემდეგ, ვიდრე ტრანსპორტირებამდე.ტრანსპორტამდე დიამეტრი იყო 19 μm, მაგრამ ტრანსპორტირების შემდეგ ის გაიზარდა 21 μm-მდე.ტრანსპორტირებამდე გაერთიანება იყო 20%, მაგრამ ტრანსპორტირების შემდეგ 25%-მდე გაიზარდა.Countstar Rigel-ის მიერ გადაღებული სურათებიდან, AdMSC-ების ფენოტიპი ტრანსპორტირების შემდეგ მკვეთრად შეიცვალა.შედეგები ნაჩვენებია სურათზე 4.
სურათი 4: დიამეტრი და აგრეგაციის შედეგები.პასუხი: AdMSC-ების წარმომადგენლობითი გამოსახულებები, AdMSC-ების ფენოტიპი ტრანსპორტირების შემდეგ მკვეთრად შეიცვალა.ბ: ტრანსპორტირებამდე აგრეგაცია იყო 20%, მაგრამ ტრანსპორტირების შემდეგ ის გაიზარდა 25%-მდე.C: ტრანსპორტამდე დიამეტრი იყო 19 μm, მაგრამ ტრანსპორტირების შემდეგ ის გაიზარდა 21 μm-მდე.
განსაზღვრეთ AdMSC-ების იმუნოფენოტიპი Countstar Rigel-ის მიერ
AdMSC-ების იმუნოფენოტიპი განისაზღვრა Countstar Rigel-ის მიერ, AdMSC-ები ინკუბირებული იყო შესაბამისად სხვადასხვა ანტისხეულებით (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).სიგნალის ფერის გამოყენების პროცედურა შეიქმნა მწვანე არხის დაყენებით PE ფლუორესცენციის გამოსახულებაზე, პლუს ნათელი ველით.ნათელი ველის სურათის მითითების სეგმენტაცია გამოყენებული იყო ნიღბის სახით PE ფლუორესცენციის სიგნალის სინჯისთვის.ნაჩვენები იყო CD105-ის შედეგები (სურათი 5).
სურათი 5: CD105 AdMSC-ების შედეგები განისაზღვრა Countstar Rigel-ის მიერ.პასუხი: CD105-ის დადებითი პროცენტის რაოდენობრივი ანალიზი სხვადასხვა ნიმუშებში FCS express 5 plus პროგრამული უზრუნველყოფის საშუალებით.B: მაღალი ხარისხის სურათები გვაწვდის დამატებით მორფოლოგიურ ინფორმაციას.C: დადასტურებული შედეგები თითოეული უჯრედის ესკიზებით, FCS პროგრამულმა ინსტრუმენტებმა დაყვეს უჯრედები სხვადასხვა ჯგუფებად მათი განსხვავებული ცილის გამოხატვის მიხედვით.
სხვა ანტისხეულების შედეგები ნაჩვენები იყო ნახაზ 6-ში
სურათი 6: A: ASC-ების წარმომადგენლობითი გამოსახულება ტიპიური spindle-ის ფორმის მორფოლოგიით.გადაღებული OLYMPUS მიკროსკოპით.ორიგინალური გადიდება, (10x).B: ASC-ების ადიპოგენური დიფერენციაცია დასტურდება რუთენიუმის წითელი შეფერილობით, რომელიც აჩვენებს მინერალიზაციის სფეროებს.გადაღებული OLYMPUS მიკროსკოპით.ორიგინალური გადიდება (10x).C: Countstar FL ASC-ების დახასიათება.
Შემაჯამებელი:
Countstar FL-ს შეუძლია აკონტროლოს კონცენტრაცია, სიცოცხლისუნარიანობა და ფენოტიპის მახასიათებლები (და მათი ცვლილებები) ამ ღეროვანი უჯრედების წარმოებისა და დიფერენციაციის დროს.FCS Express აწვდის ფუნქციას, გადახედოს ყველა სიგნალის უჯრედს, გადაამოწმოს მონაცემები სურათის საშუალებით.მომხმარებელს ასევე შეუძლია ჰქონდეს ნდობა, რომ განახორციელოს შემდეგი ექსპერიმენტები Countstar Rigel-ის შედეგებზე დაყრდნობით.Countstar Rigel გთავაზობთ სწრაფ, დახვეწილ და საიმედო მეთოდს ღეროვანი უჯრედების ხარისხის კონტროლისთვის.
