ლეიკოციტების პირდაპირი ანალიზი მთლიან სისხლში ლიზინგის გარეშე

ლეიკოციტების ანალიზი მთლიან სისხლში არის რუტინული ანალიზი კლინიკურ ლაბორატორიაში ან სისხლის ბანკში.ლეიკოციტების კონცენტრაცია და სიცოცხლისუნარიანობა არის სასიცოცხლო მაჩვენებელი, როგორც სისხლის შენახვის ხარისხის კონტროლი.ლეიკოციტების გარდა, მთლიანი სისხლი შეიცავს დიდი რაოდენობით თრომბოციტებს, სისხლის წითელ უჯრედებს ან უჯრედულ ნამსხვრევებს, რაც შეუძლებელს ხდის მთლიანი სისხლის ანალიზს უშუალოდ მიკროსკოპის ან ნათელი ველის უჯრედების მრიცხველის ქვეშ.სისხლის თეთრი უჯრედების დათვლის ჩვეულებრივი მეთოდები მოიცავს სისხლის წითელი უჯრედების ლიზისის პროცესს, რაც შრომატევადია.

AOPI ორმაგი ფლუორესცის დათვლა არის ანალიზის ტიპი, რომელიც გამოიყენება უჯრედის კონცენტრაციისა და სიცოცხლისუნარიანობის გამოსავლენად.ხსნარი არის აკრიდინის ფორთოხლის (მწვანე-ფლუორესცენტული ნუკლეინის მჟავის ლაქა) და პროპიდიუმის იოდიდის (წითელ-ფლუორესცენტული ნუკლეინის მჟავას ლაქა) კომბინაცია.პროპიდიუმის იოდიდი (PI) არის მემბრანის გამომრიცხავი საღებავი, რომელიც ხვდება მხოლოდ დაზიანებული მემბრანის უჯრედებში, ხოლო აკრიდინის ფორთოხალს შეუძლია შეაღწიოს პოპულაციის ყველა უჯრედში.როდესაც ორივე საღებავი იმყოფება ბირთვში, პროპიდიუმის იოდიდი იწვევს აკრიდინის ფორთოხლის ფლუორესცენტის შემცირებას ფლუორესცენტული რეზონანსული ენერგიის გადაცემით (FRET).შედეგად, დაუზიანებელი მემბრანებით ბირთვული უჯრედები იღებება ფლუორესცენტულ მწვანედ და ითვლება ცოცხალად, ხოლო ბირთვული უჯრედები დაზიანებული მემბრანებით მხოლოდ ფლუორესცენტულ წითლად ღებავს და ითვლება მკვდრად Countstar® Rigel სისტემის გამოყენებისას.

Countstar Rigel არის იდეალური გადაწყვეტა მრავალი რთული უჯრედული პოპულაციის დამახასიათებელი ანალიზისთვის, რომელიც საშუალებას იძლევა სწრაფად გაანალიზდეს სისხლის თეთრი უჯრედები მთლიან სისხლში.

ექსპერიმენტული პროცედურა:

1. აიღეთ 20 μl სისხლის ნიმუში და განზავეთ ნიმუში 180 μl PBS-ში.
2. დაამატეთ 12µl AO/PI ხსნარი 12µl ნიმუშში, ნაზად შერეული პიპეტით;
3. გადაიტანეთ 20µl ნარევი კამერის სლაიდში;
4. მიეცით უჯრედები კამერაში დაახლოებით 1 წუთის განმავლობაში;
5. ჩასვით სლაიდი Countstar FL ინსტრუმენტში;
6. აირჩიეთ „AO/PI სიცოცხლისუნარიანობა“ და შემდეგ შეიყვანეთ ნიმუშის ID ამ ნიმუშისთვის.
7. აირჩიეთ განზავების კოეფიციენტი, უჯრედის ტიპი, დააწკაპუნეთ 'Run' ტესტის დასაწყებად.

სიფრთხილე: AO და PI არის პოტენციური კანცეროგენი.რეკომენდირებულია ოპერატორმა ატაროს პერსონალური დამცავი მოწყობილობა (PPE) კანთან და თვალებთან უშუალო კონტაქტის თავიდან ასაცილებლად.

შედეგი:

1. მთლიანი სისხლის ნათელი ველის სურათი

მთლიანი სისხლის ნათელი ველის გამოსახულებაში, WBC არ ჩანს სისხლის წითელ უჯრედებს შორის.(Ფიგურა 1)

სურათი 1 მთლიანი სისხლის ნათელი ველის გამოსახულება.

2. მთლიანი სისხლის ფლუორესცენციული გამოსახულება

AO და PI საღებავი ორივე დნმ-ის ლაქებია უჯრედის ბირთვში.ამიტომ, თრომბოციტები, სისხლის წითელი უჯრედები ან უჯრედული ნამსხვრევები ვერ ახდენენ გავლენას ლეიკოციტების კონცენტრაციაზე და სიცოცხლისუნარიანობაზე.ცოცხალი ლეიკოციტები (მწვანე) და მკვდარი ლეიკოციტები (წითელი) ადვილად ვიზუალურად ჩანს ფლუორესცენციულ სურათებში.(სურათი 2)

სურათი 2 მთლიანი სისხლის ფლუორესცენციული გამოსახულებები.(A).AO Channel-ის სურათი;(B) PI არხის გამოსახულება;(C) AO და PI Channel-ის სურათების შერწყმა.

3. ლეიკოციტების კონცენტრაცია და სიცოცხლისუნარიანობა

Countstar FL პროგრამული უზრუნველყოფა ავტომატურად ითვლის სამი კამერის განყოფილების უჯრედებს და ითვლის WBC უჯრედების მთლიანი რაოდენობის საშუალო მნიშვნელობას (1202), კონცენტრაციას (1,83 x 106 უჯრედი/მლ) და % სიცოცხლისუნარიანობას (82,04%).მთლიანი სისხლის სურათები და მონაცემები შეიძლება ადვილად ექსპორტირებული იყოს PDF, გამოსახულების ან Excel-ის სახით დამატებითი ანალიზის ან მონაცემთა არქივისთვის.