Countstar жүйесі кескін цитометрі мен ұяшықтар есептегішін бір стендтік аспапқа біріктіреді.Бұл қолданбалы, ықшам және автоматтандырылған жасушалық бейнелеу жүйесі жасушаларды санауды, өміршеңдігін (AO/PI, трипан көк), апоптозды (Annexin V-FITC/PI), жасушаны қоса алғанда, рак клеткаларын зерттеуге арналған біртұтас шешімді ұсынады. цикл (PI) және GFP/RFP трансфекциясы.
Аннотация
Қатерлі ісік дүние жүзінде өлім-жітімнің негізгі себептерінің бірі болып табылады және онкологиялық ауруларды емдеудің жаңа әдістерін дамытудың маңызы зор.Қатерлі ісік жасушасы қатерлі ісіктің негізгі зерттеу нысаны болып табылады, әртүрлі ақпаратты рак клеткасынан бағалау қажет.Бұл зерттеу аймағы жылдам, сенімді, қарапайым және егжей-тегжейлі жасуша талдауын қажет етеді.Countstar жүйесі қатерлі ісік жасушаларын талдау үшін қарапайым шешім платформасын ұсынады.
Рак жасушаларының апоптозын зерттеген Countstar Rigel
Апоптозды талдау көптеген зертханаларда жасуша дақылдарының денсаулығын бағалаудан бастап қосылыстар панелінің уыттылығын бағалауға дейін әртүрлі мақсаттарда қолданылады.
Апоптоз талдауы - Annexin V-FITC/PI бояу әдісімен жасушалардың апоптоз пайызын анықтау үшін қолданылатын түрі.Анексин V ерте апоптоз немесе некроз жасушасы бар фосфатидилсеринмен (PS) байланысады.PI тек некротикалық/өте кеш сатыдағы апоптозды жасушаларға енеді.(1-сурет)
A: ерте апоптоз Анексин V (+), PI (-)
B: кеш апоптоз V қосымшасы (+), PI (+)
1-сурет: Анексин V FITC және PI көмегімен өңделген 293 ұяшықтан тұратын Countstar Rigel суреттерінің үлкейтілген мәліметтері (5 есе үлкейту).
Қатерлі ісік жасушасының жасушалық циклін талдау
Жасуша циклі немесе жасушаның бөліну циклі - бұл екі еншілес жасушаны шығару үшін оның ДНҚ-ның (ДНҚ репликациясының) бөлінуіне және қайталануына әкелетін жасушада орын алатын оқиғалар тізбегі.Ядросы бар жасушаларда, эукариоттар сияқты, жасушалық цикл де үш кезеңге бөлінеді: интерфаза, митоздық (М) фаза және цитокинез.Пропидий йодид (PI) - жасуша циклін өлшеу үшін жиі қолданылатын ядролық бояу бояуы.Бояғыш тірі жасушаларға кіре алмайтындықтан, бояу алдында жасушалар этанолмен бекітіледі.Содан кейін барлық жасушалар боялады.Бөлінуге дайындалып жатқан жасушалар ДНҚ-ның көбеюін қамтиды және пропорционалды түрде жоғарылаған флуоресценцияны көрсетеді.Флуоресценция қарқындылығындағы айырмашылықтар жасушалық циклдің әрбір фазасындағы жасушалардың пайызын анықтау үшін қолданылады.Countstar суретті түсіре алады және нәтижелер FCS экспресс бағдарламалық құралында көрсетіледі.(2-сурет)
2-сурет: MCF-7 (A) және 293T (B) PI бар жасушалық циклді анықтау жинағымен боялған, нәтижелерді Countstar Rigel анықтаған және FCS express арқылы талданған.
Жасушадағы өміршеңдік пен GFP трансфекциясын анықтау
Биопроцесс кезінде GFP жиі индикатор ретінде рекомбинантты ақуызды біріктіру үшін қолданылады.GFP флуоресцентінің мақсатты ақуыз көрінісін көрсететінін анықтаңыз.Countstar Rigel GFP трансфекциясын және өміршеңдігін тексеру үшін жылдам және қарапайым талдауды ұсынады.Өлі жасуша популяциясын және жалпы жасуша популяциясын анықтау үшін жасушалар Propidium iodide (PI) және Hoechst 33342 боялған.Countstar Rigel GFP өрнек тиімділігі мен өміршеңдігін бір уақытта бағалаудың жылдам, сандық әдісін ұсынады.(4-сурет)
4-сурет: Ұяшықтар Hoechst 33342 (көк) көмегімен орналасқан және GFP экспрессивті ұяшықтардың пайызын (жасыл) оңай анықтауға болады.Тіршіліксіз жасуша пропидий йодидімен (PI; қызыл) боялады.
Тіршілікке қабілеттілік және жасуша саны
AO/PI Қос флуоресцентті санау - жасуша концентрациясын, өміршеңдігін анықтау үшін қолданылатын талдау түрі.Ол әртүрлі жасуша түріне сәйкес жасуша линиясын санау және бастапқы жасуша санау болып бөлінеді.Ерітінді құрамында жасыл флуоресцентті нуклеин қышқылы дақтары, акридин апельсин және қызыл флуоресцентті нуклеин қышқылы дақтары, пропидий йодид комбинациясы бар.Пропидий йодид - бұл мембранадан шығарылатын бояғыш, ол тек мембранасы бұзылған жасушаларға енеді, ал акридин апельсин популяциядағы барлық жасушаларға енеді.Екі бояғыш ядрода болған кезде, пропидий йодид флуоресценциялық резонансты энергияны тасымалдау (FRET) арқылы акридинді қызғылт сары флуоресценцияның төмендеуін тудырады.Нәтижесінде мембранасы бұзылмаған ядролы жасушалар флуоресцентті жасыл түске боялады және тірі деп есептеледі, ал мембранасы бұзылған ядролы жасушалар тек флуоресцентті қызыл түске боялады және Countstar Rigel жүйесін пайдаланған кезде өлі болып есептеледі.Эритроциттер, тромбоциттер және қоқыстар сияқты ядросыз материал флуоресценттенбейді және оларды Countstar Rigel бағдарламалық құралы елемейді.(5-сурет)
5-сурет: Countstar PBMC концентрациясын және өміршеңдігін қарапайым, дәл анықтау үшін қос флуоресцентті бояу әдісін оңтайландырды.AO/PI-мен боялған үлгілерді Counstar Rigel көмегімен талдауға болады
