Аннотация: Мезенхималық дің жасушалары - мезодермадан оқшаулануға болатын плюрипотентті дің жасушаларының ішкі жиынтығы.Өзін-өзі репликациялауды жаңарту және көп бағытты дифференциациялау сипаттамаларымен олар медицинадағы әртүрлі терапия үшін жоғары әлеуетке ие.Мезенхималық дің жасушаларының бірегей иммундық фенотипі және иммундық реттеу қабілеті бар.Сондықтан мезенхималық дің жасушалары дің жасушаларын трансплантациялауда, тіндік инженерияда және органдарды трансплантациялауда кеңінен қолданылады.Осы қолданбалардан басқа, олар негізгі және клиникалық зерттеу эксперименттер сериясында сепкіш жасушалар ретінде тіндік инженерияда тамаша құрал ретінде пайдаланылады.Осы уақытқа дейін мезенхималық дің жасушаларының сапасын бақылаудың жалпы қабылданған әдісі мен стандарты жоқ.Countstar Rigel осы дің жасушаларын өндіру және саралау кезінде концентрациясын, өміршеңдігін және фенотип сипаттамаларын (және олардың өзгерістерін) бақылай алады.Countstar Rigel ұяшық сапасын бақылаудың бүкіл процесі кезінде тұрақты жарық өрісі және флуоресценция негізіндегі кескін жазбалары арқылы қамтамасыз етілген қосымша морфологиялық ақпаратты алуда да артықшылығы бар.Countstar Rigel дің жасушаларының сапасын бақылаудың жылдам, күрделі және сенімді әдісін ұсынады.
Материалдар мен тәсілдер:
Майдан алынған мезенхималық дің жасушаларын (AdMSCs) AO/PI бояу ерітіндісі (Shanghai RuiYu, CF002) профессор Нианмин Ци сыйға тартты.Антидене: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD компаниясы).
AdMSC 37℃, 5% CO2 ылғалдандырылған инкубаторда өсірілді.Қолданар алдында трипсинмен сіңіріңіз.
CD маркерін бояу процедурасы антидене нұсқаулығы ретінде орындалды.
Countstar Rigel көмегімен CD маркерін анықтау:
1. PE арнасын кескін PE флуоресценциясына орнату арқылы сигнал түсті қолдану процедурасы жасалды.
2. Әр камерадан 3 танап алынды.
3. Бейнелеу және бастапқы талдау аяқталғаннан кейін оң және теріс трансфекцияға арналған шекті (лог қақпасы) параметрі FCS бағдарламалық құралы арқылы орнатылды.
Дің жасушаларының сапасын бақылау
Келесі суретте (1-сурет) процедурасы көрсетілген дің жасушаларының терапиясы .
1-сурет: Дің жасушаларын емдеу процедурасы
Нәтижелер:
AdMSCs концентрациясын, өміршеңдігін, диаметрін және агрегациясын анықтау.
AdMSCs өміршеңдігі AO/PI арқылы анықталды, Жасыл арна мен Қызыл арна кескінін AO және PI флуоресценциясына, сонымен қатар жарқын өріске орнату арқылы қос түсті қолданба процедурасы жасалды.Мысал суреттер 2-суретте көрсетілген.
Сурет 2. AdMSCs тасымалдауға дейінгі және тасымалдаудан кейінгі суреттер.A. Тасымалдау алдында;репрезентативті сурет көрсетіледі.B. Тасымалданғаннан кейін;репрезентативті сурет көрсетіледі.
AdMSCs өміршеңдігі тасымалдауға дейінгімен салыстырғанда тасымалдаудан кейін күрт өзгерді.Тасымалдауға дейін өміршеңдігі 92% болса, тасымалдаудан кейін ол 71% дейін төмендеді.Нәтиже 3-суретте көрсетілген.
Сурет 3. AdMSCs өміршеңдігінің нәтижелері (тасымалдауға дейін және тасымалдаудан кейін)
Диаметрі мен агрегациясын Countstar Rigel анықтаған.AdMSC диаметрі тасымалдауға дейінгімен салыстырғанда тасымалдаудан кейін күрт өзгерді.Тасымалдау алдында диаметрі 19 мкм болса, тасымалдаудан кейін ол 21 мкм дейін өсті.Тасымалдауға дейінгі жинақтау 20%-ды құраса, тасымалдаудан кейін 25%-ға дейін өсті.Countstar Rigel түсірген суреттерден AdMSCs фенотипі тасымалдаудан кейін күрт өзгерді.Нәтижелер 4-суретте көрсетілген.
4-сурет: Диаметр және біріктіру нәтижелері.A: AdMSCs өкілдік кескіндері, AdMSCs фенотипі тасымалдаудан кейін күрт өзгерді.B: Тасымалдауға дейінгі жинақтау 20% болса, тасымалдаудан кейін ол 25% дейін өсті.C: Тасымалдау алдында диаметрі 19 мкм болды, бірақ тасымалдаудан кейін ол 21 мкм дейін өсті.
Констар Ригель бойынша AdMSCs иммунофенотипін анықтаңыз
AdMSC иммунофенотипін Countstar Rigel анықтады, AdMSCs сәйкесінше әртүрлі антиденелермен инкубацияланды (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Сигнал түсін қолдану процедурасы жасыл арнаны кескін PE флуоресценциясына, сонымен қатар жарқын өріске орнату арқылы жасалды.Жарқын өріс суретінің сілтеме сегментациясы PE флуоресценция сигналын таңдау үшін маска ретінде қолданылды.CD105 нәтижелері көрсетілді (5-сурет).
5-сурет: AdMSC CD105 нәтижелерін Countstar Rigel анықтады.A: FCS express 5 плюс бағдарламалық құралы арқылы әртүрлі үлгілердегі CD105 оң пайызының сандық талдауы.B: Жоғары сапалы кескіндер қосымша морфологиялық ақпаратты береді.C: Әрбір ұяшықтың нобайлары арқылы расталған нәтижелер, FCS бағдарламалық құралы жасушаларды әртүрлі ақуыз экспрессиясына сәйкес әртүрлі топтарға бөлді.
Басқа антиденелердің нәтижелері 6-суретте көрсетілген
6-сурет: A: типтік шпиндель тәрізді морфологиясы бар ASC-тің репрезентативті бейнесі.OLYMPUS микроскопымен түсірілген.Бастапқы үлкейту, (10x).B: ASCs адипогенді дифференциациясы минералдану аймақтарын көрсететін рутений қызыл бояуымен дәлелденеді.OLYMPUS микроскопымен түсірілген.Бастапқы үлкейту (10x).C: ASC-тің Countstar FL сипаттамасы.
Түйіндеме:
Countstar FL осы дің жасушаларын өндіру және саралау кезінде концентрацияны, өміршеңдігін және фенотип сипаттамаларын (және олардың өзгерістерін) бақылай алады.FCS express әрбір сигнал ұяшығын қарап шығу, кескін арқылы деректерді тексеру функциясын қамтамасыз етеді.Пайдаланушы сонымен қатар Countstar Rigel нәтижелеріне негізделген келесі эксперименттерді орындауға сенімді бола алады.Countstar Rigel дің жасушаларының сапасын бақылаудың жылдам, күрделі және сенімді әдісін ұсынады.
