Жалпы қандағы лейкоциттерді талдау клиникалық зертханада немесе қан банкінде әдеттегі талдау болып табылады.Лейкоциттердің концентрациясы мен өміршеңдігі қан сақтау сапасын бақылаудың маңызды көрсеткіші болып табылады.Лейкоциттерден басқа, толық қанда көптеген тромбоциттер, қызыл қан жасушалары немесе жасушалық қалдықтар бар, бұл микроскоптың немесе жарқын өріс жасушаларының есептегішінің астында тұтас қанды талдауды мүмкін емес етеді.Ақ қан жасушаларын санаудың дәстүрлі әдістері көп уақытты қажет ететін эритроциттердің лизисін қамтиды.
AOPI қос флуоресцентті санау - жасуша концентрациясы мен өміршеңдігін анықтау үшін қолданылатын талдау түрі.Ерітінді акридин апельсин (жасыл-флуоресцентті нуклеин қышқылы дақ) және пропидий йодид (қызыл-флуоресцентті нуклеин қышқылы дақ) қосындысы болып табылады.Пропидиум йодид (PI) - мембраналық эксклюзивті бояғыш, ол тек мембранасы бұзылған жасушаларға енеді, ал акридин апельсин популяциядағы барлық жасушаларға енеді.Екі бояғыш ядрода болған кезде, пропидий йодид флуоресценциялық резонансты энергияны тасымалдау (FRET) арқылы акридинді қызғылт сары флуоресценцияның төмендеуін тудырады.Нәтижесінде мембранасы бұзылмаған ядросы бар жасушалар флуоресцентті жасыл түске боялады және тірі деп есептеледі, ал мембранасы бұзылған ядролы жасушалар тек флуоресцентті қызыл түске боялады және Countstar® Rigel жүйесін пайдаланған кезде өлі болып есептеледі.
Countstar Rigel - бұл қандағы ақ қан жасушаларын жылдам талдауға мүмкіндік беретін көптеген күрделі жасуша популяциясын сипаттау талдаулары үшін тамаша шешім.
Эксперименттік процедура:
1. 20 мкл қан үлгісін алыңыз және үлгіні 180 мкл PBS ішінде сұйылтыңыз.
2. Тамшуырмен ақырын араластырылған 12 мкл үлгіге 12 мкл AO/PI ерітіндісін қосыңыз;
3. Камера слайдына 20 мкл қоспаны салыңыз;
4.Жасушалардың камерада шамамен 1 минут тұруына рұқсат етіңіз;
5. Слайдты Countstar FL құралына салыңыз;
6. “AO/PI өміршеңдігі” талдауын таңдап, осы үлгі үшін үлгі идентификаторын енгізіңіз.
7.Сұйылту коэффициентін, Ұяшық түрін таңдаңыз, сынақты бастау үшін «Орындау» түймесін басыңыз.
Абайлаңыз: AO және PI ықтимал канцероген болып табылады.Теріге және көзге тікелей тиіп кетпеу үшін операторға жеке қорғаныс құралдарын (ЖҚҚ) кию ұсынылады.
Нәтиже:
1. Толық қанның жарқын өріс кескіні
Жалпы қанның жарқын далалық кескінінде WBC қызыл қан жасушаларының арасында көрінбейді.(1-сурет)
1-сурет Жалпы қанның жарқын далалық кескіні.
2. Толық қанның флуоресценциялық кескіні
AO және PI бояғыштары жасушалардың жасуша ядросындағы ДНҚ-ны бояйды.Сондықтан тромбоциттер, қызыл қан жасушалары немесе жасушалық қалдықтар лейкоциттердің концентрациясына және өміршеңдігінің нәтижесіне әсер ете алмайды.Флуоресценция суреттерінде тірі лейкоциттер (Жасыл) және өлі лейкоциттер (Қызыл) оңай көрінеді.(2-сурет)
2-сурет Жалпы қанның флуоресценциялық кескіндері.(А).AO арнасының суреті;(B) PI арнасының кескіні;(C) AO және PI арнасының кескіндерін біріктіру.
3. Лейкоциттердің концентрациясы және өміршеңдігі
Countstar FL бағдарламалық құралы үш камералық секцияның жасушаларын автоматты түрде санайды және WBC жасушаларының жалпы санының (1202), концентрациясының (1,83 x 106 жасуша/мл) және өміршеңдігінің (82,04%) орташа мәнін есептейді.Толық қан кескіндері мен деректерін қосымша талдау немесе деректерді мұрағаттау үшін PDF, кескін немесе Excel форматында оңай экспорттауға болады.
3-сурет Countstar Rigel бағдарламалық құралының скриншоты
