ការវិភាគដោយផ្ទាល់នៃ leukocytes នៅក្នុងឈាមទាំងមូលដោយគ្មានការលីស

ការវិភាគលើ leukocytes នៅក្នុងឈាមទាំងមូលគឺជាការវិភាគទម្លាប់នៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍គ្លីនិក ឬធនាគារឈាម។ការផ្តោតអារម្មណ៍ និងលទ្ធភាពជោគជ័យនៃ leukocytes គឺជាសន្ទស្សន៍ដ៏សំខាន់ដែលជាការត្រួតពិនិត្យគុណភាពនៃការផ្ទុកឈាម។ក្រៅពី leukocyte ឈាមទាំងមូលផ្ទុកនូវផ្លាកែត កោសិកាឈាមក្រហម ឬកំទេចកំទីកោសិកាជាច្រើន ដែលធ្វើឱ្យវាមិនអាចវិភាគឈាមទាំងមូលដោយផ្ទាល់នៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍ ឬឧបករណ៍រាប់កោសិកាវាលភ្លឺ។វិធីសាស្រ្តសាមញ្ញដើម្បីរាប់កោសិកាឈាមសពាក់ព័ន្ធនឹងដំណើរការ RBC lysis ដែលចំណាយពេលច្រើន។

ការរាប់ AOPI Dual-fluoresces គឺជាប្រភេទតេស្តដែលប្រើសម្រាប់រកមើលកំហាប់កោសិកា និងលទ្ធភាពជោគជ័យ។ដំណោះស្រាយគឺការរួមបញ្ចូលគ្នានៃពណ៌ទឹកក្រូច acridine (ស្នាមប្រឡាក់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកពណ៌បៃតង - ហ្វ្លុយអូរីស) និងប្រូភីដ្យូមអ៊ីយ៉ូត (ស្នាមប្រឡាក់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្រហម - ហ្វ្លុយអូរីស) ។Propidium iodide (PI) គឺជាថ្នាំជ្រលក់ដែលមិនរាប់បញ្ចូលភ្នាសដែលចូលទៅក្នុងកោសិកាដែលមានភ្នាសសម្របសម្រួល ខណៈពេលដែលពណ៌ទឹកក្រូច acridine អាចជ្រាបចូលទៅក្នុងកោសិកាទាំងអស់ក្នុងចំនួនប្រជាជនមួយ។នៅពេលដែលថ្នាំជ្រលក់ទាំងពីរមានវត្តមាននៅក្នុងស្នូល ប្រូភីដ្យូម អ៊ីយ៉ូត បណ្តាលឱ្យមានការថយចុះនៃហ្វ្លុយអូរីពណ៌ទឹកក្រូចអាគ្រីឌីន ដោយការផ្ទេរថាមពល ហ្វ្រូរ៉េសសេនស័រ (FRET)។ជាលទ្ធផល កោសិកា nucleated ដែលមានភ្នាសនៅដដែលមានស្នាមប្រឡាក់ពណ៌បៃតង ហើយត្រូវបានរាប់ថាមានជីវិត ចំណែកឯកោសិកា nucleated ដែលមានភ្នាសសម្របសម្រួលមានតែស្នាមប្រឡាក់ fluorescent ពណ៌ក្រហម ហើយត្រូវបានរាប់ថាស្លាប់នៅពេលប្រើប្រាស់ប្រព័ន្ធCountstar® Rigel។

Countstar Rigel គឺជាដំណោះស្រាយដ៏ល្អសម្រាប់ការវិភាគលក្ខណៈចំនួនកោសិកាស្មុគ្រស្មាញជាច្រើន ដែលអនុញ្ញាតឱ្យធ្វើការវិភាគយ៉ាងឆាប់រហ័សនូវកោសិកាឈាមសក្នុងឈាមទាំងមូល។

ដំណើរការពិសោធន៍៖

1. យកគំរូឈាម 20 µl ហើយពនលាយសំណាកក្នុង 180 µl នៃ PBS ។
2. បន្ថែមដំណោះស្រាយ 12µl AO/PI ទៅក្នុងគំរូ 12µl លាយថ្នមៗជាមួយ pipette;
3. គូរល្បាយ 20µl ចូលទៅក្នុងស្លាយបន្ទប់;
4. អនុញ្ញាតឱ្យកោសិកាតាំងទីលំនៅក្នុងបន្ទប់ប្រហែល 1 នាទី;
5.Insect ស្លាយចូលទៅក្នុងឧបករណ៍ Countstar FL;
6.ជ្រើសរើសការវាយតម្លៃ "AO/PI Viability" បន្ទាប់មកបញ្ចូលលេខសម្គាល់គំរូសម្រាប់គំរូនេះ។
7.Select Dilution ratio, Cell Type, ចុច 'Run' ដើម្បីចាប់ផ្តើមការសាកល្បង។

ប្រយ័ត្ន៖ AO និង PI គឺជាសារធាតុបង្កមហារីក។វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រតិបត្តិករពាក់ឧបករណ៍ការពារផ្ទាល់ខ្លួន (PPE) ដើម្បីជៀសវាងការប៉ះពាល់ដោយផ្ទាល់ជាមួយស្បែក និងភ្នែក។

លទ្ធផល៖

1. រូបភាពវាលភ្លឺនៃឈាមទាំងមូល

នៅក្នុងរូបភាពវាលភ្លឺនៃឈាមទាំងមូល WBC មិនអាចមើលឃើញក្នុងចំណោមកោសិកាឈាមក្រហម។(រូបភាព​ទី 1)

រូបភាពទី 1 រូបភាពវាលភ្លឺនៃឈាមទាំងមូល។

2. ហ្វ្លុយអូរីស រូបភាពនៃឈាមទាំងមូល

ថ្នាំជ្រលក់ AO និង PI គឺជាស្នាមប្រឡាក់ DNA ទាំងពីរនៅក្នុងស្នូលកោសិកានៃកោសិកា។ដូច្នេះ ប្លាកែត កោសិកាឈាមក្រហម ឬកំទេចកំទីកោសិកា មិនអាចប៉ះពាល់ដល់កំហាប់ leukocytes និងលទ្ធផលលទ្ធភាពជោគជ័យបានទេ។leukocytes បន្តផ្ទាល់ (បៃតង) និង leukocytes ស្លាប់ (ក្រហម) ត្រូវបានគេមើលឃើញយ៉ាងងាយស្រួលនៅក្នុងរូបភាព fluorescence ។(រូបភាពទី 2)

រូបភាពទី 2 រូបភាពហ្វ្លុយអូរីសនៃឈាមទាំងមូល។(ក).រូបភាពនៃប៉ុស្តិ៍ AO;(ខ) រូបភាពនៃ PI Channel;(គ) បញ្ចូលគ្នានូវរូបភាពនៃ AO និង PI Channel ។

3. ការប្រមូលផ្តុំនិងលទ្ធភាពជោគជ័យនៃ leukocytes

កម្មវិធី Countstar FL រាប់កោសិកានៃផ្នែកបីអង្គជំនុំជម្រះដោយស្វ័យប្រវត្តិ ហើយគណនាតម្លៃជាមធ្យមនៃចំនួនកោសិកា WBC សរុប (1202) ការផ្តោតអារម្មណ៍ (1.83 x 106 កោសិកា/ml) និង % លទ្ធភាពទទួលបាន (82.04%) ។រូបភាព និងទិន្នន័យទាំងមូលអាចត្រូវបាននាំចេញយ៉ាងងាយស្រួលជា PDF, រូបភាព ឬ Excel សម្រាប់ការវិភាគបន្ថែម ឬការរក្សាទុកទិន្នន័យ។

រូបភាពទី 3 រូបថតអេក្រង់នៃកម្មវិធី Countstar Rigel