ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ಸಂಶೋಧನೆಯಲ್ಲಿ ಕೌಂಟ್ಸ್ಟಾರ್ನ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ಗಳು

ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಇಮೇಜ್ ಸೈಟೋಮೀಟರ್ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ ಕೌಂಟರ್ ಅನ್ನು ಒಂದೇ ಬೆಂಚ್-ಟಾಪ್ ಉಪಕರಣವಾಗಿ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್-ಚಾಲಿತ, ಕಾಂಪ್ಯಾಕ್ಟ್ ಮತ್ತು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಸೆಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಸೆಲ್ ಎಣಿಕೆ, ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ (AO/PI, ಟ್ರಿಪ್ಯಾನ್ ನೀಲಿ), ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ (ಅನೆಕ್ಸಿನ್ V-FITC/PI), ಕೋಶ ಸೇರಿದಂತೆ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಆಲ್-ಇನ್-ಒನ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಸೈಕಲ್ (PI), ಮತ್ತು GFP/RFP ವರ್ಗಾವಣೆ.

ಅಮೂರ್ತ

ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ ಸಾವಿನ ಪ್ರಮುಖ ಕಾರಣಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಒಂದಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಹೊಸ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ವಿಧಾನಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯು ಮಹತ್ತರವಾದ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶವು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನ ಮೂಲ ಸಂಶೋಧನಾ ವಸ್ತುವಾಗಿದೆ, ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶದಿಂದ ವಿವಿಧ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಸಂಶೋಧನಾ ಕ್ಷೇತ್ರಕ್ಕೆ ತ್ವರಿತ, ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ, ಸರಳ ಮತ್ತು ವಿವರವಾದ ಕೋಶ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಸರಳ ಪರಿಹಾರ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.

ಕೌಂಟ್ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ಅವರಿಂದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿ

ಜೀವಕೋಶದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳ ಆರೋಗ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುವುದರಿಂದ ಹಿಡಿದು ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಫಲಕದ ವಿಷತ್ವವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವವರೆಗೆ ವಿವಿಧ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಅನೇಕ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ವಾಡಿಕೆಯಂತೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ-ಎಫ್‌ಐಟಿಸಿ/ಪಿಐ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ಒಂದು ವಿಧವಾಗಿದೆ.ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ ಆರಂಭಿಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಕೋಶ ಅಥವಾ ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್ ಕೋಶದೊಂದಿಗೆ ಫಾಸ್ಫಾಟಿಡಿಲ್ಸೆರಿನ್ (ಪಿಎಸ್) ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.PI ನೆಕ್ರೋಟಿಕ್/ಬಹಳ ಕೊನೆಯ ಹಂತದ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ 1)

ಎ: ಆರಂಭಿಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ (+), ಪಿಐ (-)

ಬಿ: ಲೇಟ್ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ (+), ಪಿಐ (+)

ಚಿತ್ರ1: 293 ಕೋಶಗಳ ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ಚಿತ್ರಗಳ (5 x ವರ್ಧನೆ) ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ವಿವರಗಳು, ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ ಎಫ್‌ಐಟಿಸಿ ಮತ್ತು ಪಿಐ ಜೊತೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ

ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶದ ಕೋಶ ಚಕ್ರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರ ಅಥವಾ ಕೋಶ-ವಿಭಜನಾ ಚಕ್ರವು ಕೋಶದಲ್ಲಿ ನಡೆಯುವ ಘಟನೆಗಳ ಸರಣಿಯಾಗಿದ್ದು, ಅದರ ವಿಭಜನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎರಡು ಮಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಅದರ DNA (ಡಿಎನ್ಎ ರೆಪ್ಲಿಕೇಶನ್) ನಕಲು ಮಾಡುತ್ತದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ, ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳಂತೆ, ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರವನ್ನು ಮೂರು ಅವಧಿಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: ಇಂಟರ್ಫೇಸ್, ಮೈಟೊಟಿಕ್ (M) ಹಂತ ಮತ್ತು ಸೈಟೊಕಿನೆಸಿಸ್.ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ಒಂದು ಪರಮಾಣು ಬಣ್ಣದ ಬಣ್ಣವಾಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಡೈ ಲೈವ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲದ ಕಾರಣ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಲೆ ಹಾಕುವ ಮೊದಲು ಎಥೆನಾಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಎಲ್ಲಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಲೆ ಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಿಭಜನೆಗೆ ತಯಾರಿ ನಡೆಸುತ್ತಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ DNA ಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಾನುಗುಣವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಪ್ರತಿದೀಪಕತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ.ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರದ ಪ್ರತಿ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಎಫ್‌ಸಿಎಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ 2)

ಚಿತ್ರ 2: MCF-7 (A) ಮತ್ತು 293T (B) ಅನ್ನು PI ಯೊಂದಿಗೆ ಸೆಲ್ ಸೈಕಲ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಕಿಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದಾರೆ ಮತ್ತು FCS ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್‌ನಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ ಮತ್ತು GFP ವರ್ಗಾವಣೆ ನಿರ್ಣಯ

ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, GFP ಅನ್ನು ಸೂಚಕವಾಗಿ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬೆಸೆಯಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.GFP ಪ್ರತಿದೀಪಕವು ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ.ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ಜಿಎಫ್‌ಪಿ ವರ್ಗಾವಣೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಸರಳವಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶದ ಜನಸಂಖ್ಯೆ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು ಜೀವಕೋಶದ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ಮತ್ತು Hoechst 33342 ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ.GFP ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು Countstar Rigel ತ್ವರಿತ, ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ವಿಧಾನವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ 4)

ಚಿತ್ರ 4: ಕೋಶಗಳು Hoechst 33342 (ನೀಲಿ) ಬಳಸಿ ನೆಲೆಗೊಂಡಿವೆ ಮತ್ತು GFP ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಕೋಶಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು (ಹಸಿರು) ಅನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಬಹುದು.ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಲ್ಲದ ಕೋಶವನ್ನು ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI; ಕೆಂಪು) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ

AO/PI ಡ್ಯುಯಲ್-ಫ್ಲೋರೊಸೆಸ್ ಎಣಿಕೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆ, ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಬಳಸುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕಾರವಾಗಿದೆ.ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರದ ಪ್ರಕಾರ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ ಎಣಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಕೋಶ ಎಣಿಕೆ ಎಂದು ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪರಿಹಾರವು ಹಸಿರು-ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸ್ಟೇನ್, ಅಕ್ರಿಡಿನ್ ಕಿತ್ತಳೆ ಮತ್ತು ರೆಡ್ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸ್ಟೇನ್, ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ ಒಂದು ಪೊರೆಯ ಹೊರಗಿಡುವ ಬಣ್ಣವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ರಾಜಿ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಅಕ್ರಿಡಿನ್ ಕಿತ್ತಳೆ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಭೇದಿಸುತ್ತದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ಬಣ್ಣಗಳು ಇದ್ದಾಗ, ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಎನರ್ಜಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫರ್ (FRET) ಮೂಲಕ ಆಕ್ರಿಡೈನ್ ಕಿತ್ತಳೆ ಪ್ರತಿದೀಪಕದಲ್ಲಿ ಕಡಿತವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಅಖಂಡ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಲೈವ್ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ರಾಜಿ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಣ್ಣಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ಸತ್ತಂತೆ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಅಲ್ಲದ ವಸ್ತುಗಳಾದ ಕೆಂಪು ರಕ್ತ ಕಣಗಳು, ಪ್ಲೇಟ್‌ಲೆಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಶಿಲಾಖಂಡರಾಶಿಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ನಿರ್ಲಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.(ಚಿತ್ರ 5)

ಚಿತ್ರ 5: PBMC ಏಕಾಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಸರಳ, ನಿಖರವಾದ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ಕೌಂಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ಡ್ಯುಯಲ್-ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಿದೆ.AO/PI ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೌನ್‌ಸ್ಟಾರ್ ರಿಜೆಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು