AOPI ಡ್ಯುಯಲ್-ಫ್ಲೋರೊಸೆಸ್ ಎಣಿಕೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಬಳಸುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕಾರವಾಗಿದೆ.ಪರಿಹಾರವು ಅಕ್ರಿಡಿನ್ ಕಿತ್ತಳೆ (ಹಸಿರು-ಪ್ರತಿದೀಪಕ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸ್ಟೇನ್) ಮತ್ತು ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (ಕೆಂಪು-ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸ್ಟೇನ್) ಸಂಯೋಜನೆಯಾಗಿದೆ.ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ (PI) ಒಂದು ಪೊರೆಯ ಹೊರಗಿಡುವ ಬಣ್ಣವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಕೇವಲ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಪೊರೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅಕ್ರಿಡೈನ್ ಕಿತ್ತಳೆ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಭೇದಿಸಬಲ್ಲದು.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ಬಣ್ಣಗಳು ಇದ್ದಾಗ, ಪ್ರೊಪಿಡಿಯಮ್ ಅಯೋಡೈಡ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಎನರ್ಜಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫರ್ (FRET) ಮೂಲಕ ಆಕ್ರಿಡೈನ್ ಕಿತ್ತಳೆ ಪ್ರತಿದೀಪಕದಲ್ಲಿ ಕಡಿತವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಅಖಂಡ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಸಿರು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಲೈವ್ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ರಾಜಿ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಣ್ಣಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು Countstar® FL ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ಸತ್ತಂತೆ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಅಲ್ಲದ ವಸ್ತುಗಳಾದ ಕೆಂಪು ರಕ್ತ ಕಣಗಳು, ಪ್ಲೇಟ್‌ಲೆಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಶಿಲಾಖಂಡರಾಶಿಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕವಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು Countstar® FL ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ನಿರ್ಲಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.
ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಥೆರಪಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ
ಚಿತ್ರ 4 ಕೋಶ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (MSCs) ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಎಣಿಕೆ.
AO/PI ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪಾನ್ ಬ್ಲೂ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ MSC ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ
ಚಿತ್ರ 2. A. AO/PI ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪಾನ್ ಬ್ಲೂನಿಂದ MSC ಯ ಚಿತ್ರ;2. ಸಾರಿಗೆ ಮೊದಲು ಮತ್ತು ನಂತರ AO/PI ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಯಾನ್ ನೀಲಿ ಫಲಿತಾಂಶದ ಹೋಲಿಕೆ.
ಜೀವಕೋಶದ ವಕ್ರೀಕಾರಕ ಸೂಚ್ಯಂಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳು, ಟ್ರಿಪಾನ್ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ, ಸಾಗಣೆಯ ನಂತರ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವುದು ಕಷ್ಟ.ದ್ವಿ-ಬಣ್ಣದ ಪ್ರತಿದೀಪಕವು ಜೀವಂತ ಮತ್ತು ಸತ್ತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಲೆ ಮಾಡಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ, ಶಿಲಾಖಂಡರಾಶಿಗಳು, ಪ್ಲೇಟ್‌ಲೆಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕೆಂಪು ರಕ್ತ ಕಣಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿಯೂ ನಿಖರವಾದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.
