추상적인: 중간엽 줄기세포는 중배엽에서 분리할 수 있는 만능 줄기세포의 하위 집합입니다.자기 복제 재생 및 다방향 분화 특성으로 인해 의학에서 다양한 치료법에 대한 높은 잠재력을 보유하고 있습니다.중간엽 줄기세포는 독특한 면역 표현형과 면역 조절 능력을 가지고 있습니다.따라서 간엽줄기세포는 이미 줄기세포이식, 조직공학, 장기이식 등에 널리 활용되고 있다.그리고 이러한 응용 외에도 일련의 기본 및 임상 연구 실험에서 파종 세포로 조직 공학의 이상적인 도구로 사용됩니다.현재까지 간엽줄기세포의 품질관리에 있어 널리 통용되는 방법과 기준은 없다. 은 이러한 줄기 세포의 생산 및 분화 과정에서 농도, 생존력, 표현형 특성(및 변화)을 모니터링할 수 있습니다. 은 또한 세포 품질 모니터링의 전체 프로세스 동안 영구 명시야 및 형광 기반 이미지 기록에 의해 제공되는 추가 형태학적 정보를 얻는 이점이 있습니다. 은 줄기 세포의 품질 관리를 위한 빠르고 정교하며 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다.
재료 및 방법:
지방유래 중간엽 줄기세포(AdMSCs)는 Nianmin Qi 교수, AO/PI 염색 용액(Shanghai RuiYu, CF002)에 의해 기증되었습니다.항체: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR(BD Company).
AdMSC를 37℃, 5% CO2 가습 배양기에서 배양하였다.사용하기 전에 트립신으로 소화하십시오.
CD 마커 염색 절차는 항체 매뉴얼을 따랐습니다.
Countstar Rigel 을 사용한 CD 마커 감지:
1. PE 채널을 이미지 PE 형광으로 설정하여 신호 색상 적용 절차를 만들었습니다.
2. 각 챔버에서 3개의 필드를 캡처했습니다.
3. 이미징 및 초기 분석이 완료된 후 양성 및 음성 형질감염에 대한 임계값(로그 게이트) 설정이 FCS 소프트웨어에 의해 설정되었습니다.
줄기세포 품질관리
다음 그림(그림 1)은 다음의 절차를 보여줍니다. 줄기세포 치료 .
그림 1: 줄기세포 치료 절차
결과:
AdMSC의 농도, 생존 가능성, 직경 및 응집체 결정.
AdMSC의 생존 가능성은 AO/PI에 의해 결정되었습니다. 이중 색상 적용 절차는 이미지 AO 및 PI 형광 및 명시야에 대해 녹색 채널 및 적색 채널을 설정하여 생성되었습니다.예시 이미지는 그림 2에 나와 있습니다.
그림 2. AdMSC의 운송 전과 운송 후의 이미지.A. 운송 전대표 이미지가 표시됩니다.B. 운송 후;대표 이미지가 표시됩니다.
AdMSC의 생존 가능성은 운송 전과 비교할 때 운송 후 크게 변경되었습니다.운송 전 생존율은 92%였지만 운송 후에는 71%로 감소했습니다.결과는 그림 3에 나와 있습니다.
그림 3. AdMSC의 생존성 결과(운송 전과 운송 후)
직경과 응집도 에 의해 결정되었습니다.AdMSC의 직경은 운송 전과 비교할 때 운송 후 크게 변경되었습니다.운송 전 직경은 19µm였지만 운송 후에는 21µm로 증가했습니다.운송 전의 집계는 20%였으나 운송 후에는 25%로 증가하였다. 이 캡처한 이미지에서 AdMSC의 표현형은 운송 후 크게 변경되었습니다.결과는 그림 4에 나와 있습니다.
그림 4: 직경 및 집계 결과.A: AdMSCs의 대표 이미지인 AdMSCs의 표현형은 운송 후 크게 변경되었습니다.B: 수송 전 응집은 20%였으나 수송 후에는 25%로 증가하였다.C: 수송 전의 직경은 19μm였지만 수송 후에는 21μm로 증가함.
Countstar Rigel 에 의한 AdMSC의 면역 표현형 결정
AdMSC의 면역표현형은 에 의해 결정되었고, AdMSC는 각각 다른 항체(CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR)와 함께 배양되었습니다.신호 색상 적용 절차는 PE 형광 및 명시야를 이미지화하기 위해 녹색 채널을 설정하여 생성되었습니다.명시야 사진 참조 분할은 PE 형광 신호를 샘플링하기 위한 마스크로 적용되었습니다.CD105의 결과가 표시되었습니다(그림 5).
그림 5: AdMSC의 CD105 결과는 에 의해 결정되었습니다.A: FCS express 5 plus 소프트웨어에 의한 다양한 샘플의 CD105 양성 비율의 정량적 분석.B: 고품질 이미지는 추가적인 형태학적 정보를 제공합니다.C: 모든 단일 세포의 축소판으로 검증된 결과, FCS 소프트웨어 도구는 다양한 단백질 발현에 따라 세포를 여러 그룹으로 나눴습니다.
다른 항체 결과는 도 6에 나타내었다
그림 6: A: 전형적인 스핀들 모양의 형태를 가진 ASC의 대표적인 이미지.OLYMPUS 현미경으로 캡처했습니다.원래 배율, (10x).B: ASC의 지방 생성 분화는 광물화 영역을 보여주는 루테늄 레드 염색에 의해 입증됩니다.OLYMPUS 현미경으로 캡처했습니다.원래 배율(10x).C: ASC의 FL 특성화.
요약:
Countstar FL은 이러한 줄기 세포의 생산 및 분화 과정에서 농도, 생존력, 표현형 특성(및 그 변화)을 모니터링할 수 있습니다.FCS express는 모든 신호 셀을 검토하고 이미지를 통해 데이터를 검증하는 기능을 제공합니다.또한 사용자는 결과를 기반으로 다음 실험을 수행할 자신감을 가질 수 있습니다. 은 줄기 세포의 품질 관리를 위한 빠르고 정교하며 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다.
