Pergala Countstar sîtometra wêneyê û jimarvana hucreyê di nav amûrek yek bench-top de berhev dike.Ev pergala wênekêşiya hucreyê ya serîlêdanê, kompakt, û otomatîk ji bo lêkolîna hucreya penceşêrê çareseriyek tev-di-yek peyda dike, di nav de hejmartina hucreyê, zindîbûn (AO/PI, şîn şîn), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), hucre. çerxa (PI), û veguheztina GFP/RFP.
Veqetî
Penceşêr yek ji sedemên sereke yên mirinê ye li seranserê cîhanê, û pêşxistina rêbazên nû yên dermankirina penceşêrê girîngiyek mezin e.Hucreya penceşêrê armanca lêkolîna bingehîn a penceşêrê ye, pêdivî ye ku agahdariya cihêreng ji şaneya kanserê were nirxandin.Ev qada lêkolînê pêdivî bi analîza hucreyê ya bilez, pêbawer, hêsan û berfireh heye.Pergala Countstar ji bo analîzkirina hucreya penceşêrê platformek çareseriyê ya hêsan peyda dike.
Lêkolîna Apoptoza Hucreya Penceşêrê ji hêla Countstar Rigel ve
Vekolînên Apoptosis bi rêkûpêk di gelek laboratuaran de ji bo mebestên cûrbecûr têne bikar anîn, ji nirxandina tenduristiya çandên hucreyê heya nirxandina jehrîbûna panelek pêkhateyan.
Vekolîna apoptozê celebek e ku ji bo destnîşankirina rêjeya apoptozê ya hucreyan bi rêbaza rengkirina Annexin V-FITC/PI tê bikar anîn.Annexin V bi şaneya apoptozê ya zû an jî şaneya nekrozê re bi fosfatîdylserîn (PS) ve girêdide.PI tenê dikeve hucreyên apoptotîk ên nekrotîk/qonaxa pir dereng.(Şikil 1)
A: Apoptoza destpêkê Annexin V (+), PI (-)
B: Apoptoza dereng Annexin V (+), PI (+)
Figure 1: Hûrguliyên mezinkirî yên wêneyên Countstar Rigel (5 x mezinkirin) yên 293 hucreyan, ku bi Annexin V FITC û PI ve hatî derman kirin.
Analysis Cycle Hucreya Hucreya Kanserê
Çêleka şaneyê an çerxa dabeşbûna şaneyê rêze bûyeran e ku di şaneyek de diqewimin û dibe sedema dabeşbûn û dûbarekirina ADNya wê (berberdana DNA) da ku du şaneyên keç çêbike.Di şaneyên bi navokê de, mîna eukaryotan, çerxa xaneyê jî li ser sê serdeman tê dabeşkirin: interfaz, qonaxa mîtotîk (M) û sîtokinez.Propidium iodide (PI) rengdêrek navokî ye ku pir caran ji bo pîvandina çerxa hucreyê tê bikar anîn.Ji ber ku boyax nikare bikeve hucreyên zindî, şaneyên berî rengkirinê bi etanolê têne sabît kirin.Dûv re hemî hucre têne reng kirin.Hucreyên ku ji bo dabeşbûnê amade dibin dê mîqdarên zêde yên DNA-yê hebin û bi rêjeyek zêde floransansê nîşan bidin.Cûdahiyên di tundiya floransê de têne bikar anîn da ku rêjeya şaneyan di her qonaxa çerxa şaneyê de diyar bikin.Countstar dikare wêneyê bikişîne û encam dê di nermalava FCS Express de bêne xuyang kirin.(Şikil 2)
Figure 2: MCF-7 (A) û 293T (B) bi Kit Detection cycle hucreyê bi PI-ê ve hatin reng kirin, encam ji hêla Countstar Rigel ve hatin destnîşankirin, û ji hêla FCS express ve hatin analîz kirin.
Veguheztin û Veguheztina GFP di Hucreyê de
Di dema bioprosesê de, GFP bi gelemperî wekî nîşanek bi proteîna rekombînant re tê bikar anîn.Diyar bikin ku fluorescentê GFP dikare îfadeya proteîna armanc nîşan bide.Countstar Rigel ji bo ceribandina veguheztina GFP û her weha zindîbûnê vekolînek bilez û hêsan pêşkêşî dike.Hucre bi Propidium iodide (PI) û Hoechst 33342 hatin reng kirin da ku nifûsa hucreya mirî û nifûsa hucreya tevahî diyar bike.Countstar Rigel ji bo nirxandina karîgeriya îfadeya GFP û zindîbûna di heman demê de rêbazek bilez, hejmarî pêşkêşî dike.(Şikil 4)
Figure 4: Hucreyên bi karanîna Hoechst 33342 (şîn) têne cîh kirin û rêjeya şaneyên GFP (kesk) bi hêsanî dikare were destnîşankirin.Hucreyên nebilind bi propidium iodide (PI; sor) têne reng kirin.
Zindîbûn û Hejmara Hucreyê
AO/PI Jimartina du-fluoresces celebek ceribandinê ye ku ji bo tespîtkirina giraniya hucreyê, zindîbûnê tê bikar anîn.Ew li gorî celebên cûda yên hucreyê li hejmartina rêza hucreyê û hejmartina hucreya bingehîn dabeş dibe.Di çareseriyê de hevokek ji renga asîda nukleîk a kesk-fluorescent, porteqala acridine, û renga asîda nukleîk a sorfluorescent, propidium iodide heye.Propidium iodide rengdêrek dûrxistina membranê ye ku tenê dikeve nav şaneyên xwedan parzûnên têkçûyî dema ku acridine orange di nav hemî şaneyên nifûsê de derbas dibe.Dema ku her du reng di navokê de hebin, propidium iodide dibe sedema kêmbûna fluoresansa porteqalî ya acridine bi veguheztina enerjiya rezonansê ya fluorescence (FRET).Wekî encamek, şaneyên nuklekirî yên bi membranên bêkêmasî kesk floransent reng dikin û wekî zindî têne hesibandin, lê şaneyên nuklekirî yên bi membranên têkçûyî tenê sorê floransentê dihejînin û dema ku pergala Countstar Rigel bikar tînin wekî mirî têne hesibandin.Materyalên bê navokî yên wekî şaneyên xwînê yên sor, trombîl û bermayiyan fluoressen nakin û ji hêla nermalava Countstar Rigel ve têne paşguh kirin.(Şikil 5)
Wêneyê 5: Countstar ji bo diyarkirina sade, rast a giranî û zindîbûna PBMC rêbazek rengkirina du-fluoresans xweş kiriye.Nimûneyên ku bi AO/PI-ê hatine rengkirin dikarin bi Counstar Rigel re bêne analîz kirin
