Hucreyên mononukleer ên xwînê yên periferîkî (PBMC) bi gelemperî têne pêvajoyê kirin ku bi santrîfujasyona gradientê ya tîrêjê ji xwîna tevahî veqetin.Ew hucre ji lîmfosîtan (hucreyên T, hucreyên B, hucreyên NK) û monosîtan pêk tên, ku bi gelemperî di warê immunolojî, terapiya hucreyê, nexweşiya enfeksiyonê û pêşkeftina vakslêdanê de têne bikar anîn.Şopandin û analîzkirina zindîbûn û giraniya PBMC ji bo laboratîfên klînîkî, lêkolîna zanistiya bijîjkî ya bingehîn û hilberîna hucreya berevaniyê girîng e.
Hêjî 1. PBMC ji xwîna teze bi santrîfujasyona gradientê ya Dansity veqetandî
AOPI hejmartina du-fluoresces celebek ceribandinê ye ku ji bo tespîtkirina hûrbûn û zindîbûna hucreyê tê bikar anîn.Çareserî tevlîheviya acridine orange (renga asîda nukleîk ya kesk-fluorescent) û iodide propidium (renga asîda nukleîk a sor-fluorescent) ye.Propidium iodide (PI) boyaxek jêderxistina membranê ye ku tenê dikeve nav hucreyên bi membranên têkçûyî, di heman demê de orange acridine karibe bikeve nav hemî hucreyên nifûsê.Dema ku her du reng di navokê de hebin, propidium iodide dibe sedema kêmbûna fluoresansa porteqalî ya acridine bi veguheztina enerjiya rezonansê ya fluorescence (FRET).Wekî encamek, şaneyên navokî yên bi membranên bêkêmasî kesk floransent reng dikin û wekî zindî têne hesibandin, lê şaneyên navokî yên bi membranên têkçûyî tenê sorê floransent reng dikin û dema ku pergala Countstar® FL bikar tînin wekî mirî têne hesibandin.Materyalên bê navokî yên wekî şaneyên xwînê yên sor, trombîl û bermayiyan fluoressen nakin û ji hêla nermalava Countstar® FL ve têne paşguh kirin.
Rêbaza Ezmûnî:
1.Nimûneya PBMC-ê bi PBS-ê di nav 5 hûrgelên cûda de hilweşînin;
2. 12 μl çareseriya AO/PI li 12 μl nimûneyê zêde bikin, bi nermî bi pipetê re tevlihev bikin;
3. 20µl têkelê bikşînin nav slideya odeyê;
4.Bihêlin ku hucreyên ku li dora 1 hûrdeman di odeyê de rûniştin;
5.Slide di nav amûrê Countstar FL-ê de derxînin;
6.Asay "AO/PI Viability" hilbijêrin, dûv re ji hêla Countstar FL ve ceribandin.
Hişyarî: AO û PI kanserojenek potansiyel e.Tête pêşniyar kirin ku operator alavên parastinê yên kesane (PPE) li xwe bike da ku rasterast bi çerm û çavan re nekevin têkiliyê.
Netîce:
1.Wêneyên Zeviyê Ronahî û Floresensê yên PBMC
Rengê AO û PI her du jî ADN-ê di navokê şaneya şaneyan de reng dikin.Ji ber vê yekê, trombok, hucreyên xwînê yên sor, an bermayiyên hucreyî nikaribin bandorê li ser giraniya PBMC û encamên zindîtiyê bikin.Li ser wêneyên ku ji hêla Countstar FL ve hatî çêkirin, hucreyên zindî, hucreyên mirî û bermayiyan bi hêsanî têne cûda kirin (Wêne 1).
Figure 2. Wêneyên Zeviyê Ronahî û Fluoresansê yên PBMC
2.Concentration û Viability of PBMC
Nimûneyên PBMC di 2, 4, 8 û 16 caran de bi PBS-ê re hate rijandin, dûv re ew nimûne bi tevliheviyek rengîn a AO/PI hatin inkub kirin û bi rêzê ve ji hêla Countstar FL ve hatin analîz kirin.Encama hûrbûn û zindîbûna PBMC wekî wêneya jêrîn tê destnîşan kirin:
