Countstar системасы сүрөт цитометрин жана клетка эсептегичти бир отургучтун үстүндөгү аспапка айкалыштырат.Бул колдонмого негизделген, компакттуу жана автоматташтырылган клетканы сүрөттөө системасы рак клеткаларын изилдөө үчүн бирдиктүү чечимди камсыз кылат, анын ичинде клеткаларды эсептөө, жашоо жөндөмдүүлүгү (AO/PI, трипан көк), апоптоз (Annexin V-FITC/PI), клетка цикл (PI) жана GFP/RFP трансфекциясы.
Реферат
Рак дүйнө жүзү боюнча өлүмдүн негизги себептеринин бири болуп саналат жана ракты дарылоонун жаңы ыкмаларын иштеп чыгуу чоң мааниге ээ.Рак клеткасы рактын негизги изилдөө объектиси болуп саналат, ар кандай маалымат рак клеткасынан бааланышы керек.Бул изилдөө аймагы тез, ишенимдүү, жөнөкөй жана кылдат клетка анализин талап кылат.Countstar системасы рак клеткаларын талдоо үчүн жөнөкөй чечим платформа камсыз кылат.
Рак клеткасынын апоптозун Countstar Rigel изилдөө
Апоптоз анализдери көптөгөн лабораторияларда клетка культураларынын ден соолугун баалоодон баштап кошулмалар панелинин уулуулугун баалоого чейин ар түрдүү максаттарда колдонулат.
Апоптоз анализи клеткалардын апоптоз пайызын Annexin V-FITC/PI боёо ыкмасы менен аныктоо үчүн колдонулган түрү.Annexin V эрте апоптоз клеткасы же некроз клеткасы менен phosphatidylserine (PS) менен байланышат.PI гана некротикалык / өтө кеч этаптагы апоптоздук клеткаларга кирет.(1-сүрөт)
A: Эрте апоптоз Анексин V (+), PI (-)
B: кеч апоптоз Anxin V (+), PI (+)
1-сүрөт: Анексин V FITC жана PI менен иштетилген Countstar Rigel сүрөттөрүнүн чоңойтулган деталдары (5 жолу чоңойтуу) 293 клетка
Рак клеткасынын клетка циклинин анализи
Клетка цикли же клетканын бөлүнүү цикли - бул клеткада болуп, анын бөлүнүшүнө жана анын ДНКсынын (ДНКнын репликациясынын) эки кыз клеткасын пайда болушуна алып баруучу окуялардын сериясы.Ядролуу клеткаларда эукариоттордогудай эле клетка цикли да үч мезгилге бөлүнөт: интерфаза, митоз (М) фаза жана цитокинез.Пропидий йодид (PI) клетка циклин өлчөө үчүн көп колдонулган ядролук боёк боёк.Боёк тирүү клеткаларга кире албагандыктан, боёо алдында клеткалар этанол менен бекитилет.Андан кийин бардык клеткалар боёлот.Бөлүнүүгө даярданган клеткалар ДНКнын көбөйүп бараткан санын камтыйт жана пропорционалдуу түрдө көбөйгөн флуоресценцияны көрсөтөт.Флуоресценция интенсивдүүлүгүндөгү айырмачылыктар клетка циклинин ар бир фазасындагы клеткалардын пайызын аныктоо үчүн колдонулат.Countstar сүрөттү тарта алат жана натыйжалар FCS экспресс программасында көрсөтүлөт.(2-сүрөт)
2-сүрөт: MCF-7 (A) жана 293T (B) PI менен клетка циклинин Detection Kit менен боёлуп, натыйжалар Countstar Rigel тарабынан аныкталган жана FCS экспресс менен талданган.
Жашоо жөндөмдүүлүгүн жана клеткадагы GFP трансфекциясын аныктоо
Биологиялык процесстин жүрүшүндө GFP көп учурда индикатор катары рекомбинантты протеин менен бириктирүү үчүн колдонулат.GFP fluorescent максаттуу белок сөз чагылдыра алат аныктоо.Countstar Rigel GFP трансфекциясын, ошондой эле жашоого жөндөмдүүлүгүн текшерүү үчүн тез жана жөнөкөй анализди сунуштайт.Клеткалар өлүк клетканын популяциясын жана жалпы клетка популяциясын аныктоо үчүн Propidium iodide (PI) жана Hoechst 33342 менен боелгон.Countstar Rigel ошол эле учурда GFP экспрессия натыйжалуулугун жана жашоого жөндөмдүүлүгүн баалоо үчүн тез, сандык ыкманы сунуш кылат.(4-сүрөт)
Сүрөт 4: клеткалар Hoechst 33342 (көк) менен жайгашкан жана GFP билдирүүчү клеткалардын пайызын (жашыл) оңой аныктоого болот.Жашоого жөндөмсүз клеткалар пропидий йодид (PI; кызыл) менен боёлот.
Жашоо жөндөмдүүлүгү жана клеткалардын саны
AO/PI Dual-fluoresces эсептөө клетка концентрациясын, жашоо жөндөмдүүлүгүн аныктоо үчүн колдонулган анализ түрү болуп саналат.Ал ар кандай клетка түрүнө жараша клетка линиясын эсептөө жана негизги клеткаларды эсептөө болуп бөлүнөт.Эритме жашыл-флуоресценттүү нуклеин кислотасынын богунун, акридин кызгылт сары жана кызыл флуоресценттик нуклеин кислотасынын боегинин, пропидий йодидинин айкалышын камтыйт.Propidium йодид - бул мембрананы жокко чыгаруучу боёк, ал мембранасы бузулган клеткаларга гана кирет, ал эми акридин кызгылт сары популяциянын бардык клеткаларына кирет.Эки боёк тең ядродо болгондо, пропидий йодид флуоресценттик резонанстык энергиянын (FRET) өтүшү менен акридин кызгылт сары флуоресценциянын азайышын шарттайт.Натыйжада, кабыкчалары бузулбаган ядролуу клеткалар флуоресценттик жашыл түскө боёп, тирүү деп эсептелет, ал эми мембранасы бузулган ядролуу клеткалар флуоресценттик кызыл түскө гана боёйт жана Countstar Rigel системасын колдонууда өлүк деп эсептелет.Кызыл кан клеткалары, тромбоциттер жана калдыктар сыяктуу ядросуз материал флуоресценттенбейт жана Countstar Rigel программалык камсыздоосу тарабынан этибарга алынбайт.(5-сүрөт)
Сүрөт 5: Countstar PBMC концентрациясын жана жашоого жөндөмдүүлүгүн жөнөкөй, так аныктоо үчүн кош флуоресценттик боёо ыкмасын оптималдаштырды.AO/PI менен боёлгон үлгүлөрдү Counstar Rigel менен анализдөөгө болот
