Аннотация: Мезенхималык клеткалар мезодермадан бөлүнүп алынышы мүмкүн болгон pluripotent өзөк клеткаларынын бир бөлүгү болуп саналат.Өз алдынча кайталануучу жаңылануу жана көп багыттуу дифференциациялоо өзгөчөлүктөрү менен алар медицинада ар кандай терапия үчүн жогорку потенциалга ээ.Мезенхимдик клеткалар уникалдуу иммундук фенотипке жана иммундук жөнгө салуу жөндөмүнө ээ.Ошондуктан, мезенхимдик өзөктүү клеткалар өзөктүү клеткаларды трансплантациялоодо, кыртыш инженериясында жана органдарды трансплантациялоодо кеңири колдонулат.Жана бул колдонмолордон тышкары, алар кыртыш инженериясында бир катар негизги жана клиникалык изилдөө эксперименттеринде сеялка клеткалары катары идеалдуу курал катары колдонулат.Ушул убакка чейин мезенхимдик өзөк клеткаларынын сапатын көзөмөлдөө үчүн кеңири таанылган метод жана стандарт жок.Countstar Rigel бул сөңгөк клеткаларды өндүрүү жана дифференциациялоо учурунда концентрациясын, жашоого жөндөмдүүлүгүн жана фенотип өзгөчөлүктөрүн (жана алардын өзгөрүшүн) көзөмөлдөй алат.Countstar Rigel ошондой эле клетканын сапатына мониторинг жүргүзүү процессинде туруктуу жаркыраган талаа жана флуоресценцияга негизделген сүрөт жазуулары тарабынан берилген кошумча морфологиялык маалыматты алууда артыкчылыкка ээ.Countstar Rigel өзөк клеткаларынын сапатын көзөмөлдөө үчүн тез, татаал жана ишенимдүү ыкманы сунуш кылат.
Материалдар жана ыкмалар:
Майдан алынган мезенхимдик өзөк клеткалары (AdMSCs) Professor Nianmin Qi, AO/PI боёгуч эритмеси (Shanghai RuiYu, CF002) тарабынан белекке берилди.Антителолор: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs 37℃, 5% CO2 нымдалган инкубатордо өстүрүлгөн.Колдонуудан мурун трипсин менен сиңирип алыңыз.
CD маркерди боёо процедурасы антителолордун колдонмосу катары аткарылды.
Countstar Rigel менен CD маркерди аныктоо:
1. Сигнал-түстү колдонуу процедурасы PE каналын сүрөт PE флуоресценциясына коюу менен түзүлгөн.
2. Ар бир камерадан 3 талаа алынды.
3. Сүрөткө тартуу жана баштапкы талдоо аяктагандан кийин, оң жана терс трансфекциянын босогосу (лог дарбазасы) FCS программасы тарабынан коюлган.
Уңгу клетканын сапатын көзөмөлдөө
Төмөнкү сүрөттө (1-сүрөт) процедурасы көрсөтүлгөн тамыр клетка терапиясы .
1-сүрөт: өзөк клеткасы менен дарылоо процедурасы
Натыйжалар:
AdMSCs концентрациясын, жашоого жөндөмдүүлүгүн, диаметрин жана агрегациясын аныктоо.
AdMSCтердин жашоо жөндөмдүүлүгү AO/PI тарабынан аныкталган, Жашыл канал жана Кызыл каналды AO жана PI флуоресценциясына, ошондой эле жаркыраган талаага коюу аркылуу кош түстүү колдонуу процедурасы түзүлгөн.Мисал сүрөттөр 2-сүрөттө көрсөтүлгөн.
Сүрөт 2. AdMSCs ташуу алдында жана ташуудан кийинки сүрөттөр.A. Ташуу алдында;өкүл сүрөтү көрсөтүлөт.B. Ташуудан кийин;өкүл сүрөтү көрсөтүлөт.
AdMSCsтин жашоо жөндөмдүүлүгү ташуудан мурункуга салыштырмалуу ташуудан кийин кескин өзгөрдү.Ташууга чейин жашоо жөндөмдүүлүгү 92% болсо, ташуудан кийин 71%га чейин төмөндөгөн.Натыйжа 3-сүрөттө көрсөтүлгөн.
3-сүрөт. AdMSCsтин жашоого жөндөмдүүлүгүнүн натыйжалары (ташууга чейин жана ташуудан кийин)
Диаметри жана агрегациясы да Countstar Rigel тарабынан аныкталган.AdMSCs диаметри ташууга чейинки салыштырганда ташуу кийин кескин өзгөрдү.Ташууга чейинки диаметри 19µm болгон, бирок ташуудан кийин 21µm чейин көбөйгөн.Ташууга чейинки топтоо 20%ды түзсө, ташуудан кийин 25%ке чейин өстү.Countstar Rigel тарабынан тартылган сүрөттөрдөн, AdMSCs фенотип ташуу кийин кескин өзгөргөн.Натыйжалар 4-сүрөттө көрсөтүлгөн.
4-сүрөт: Диаметр жана топтоо натыйжалары.A: AdMSCs өкүл сүрөттөрү, AdMSCs фенотип ташуу кийин кескин өзгөрдү.Б: Ташууга чейин топтоо 20% болсо, ташуудан кийин 25% га чейин өстү.C: Ташууга чейинки диаметри 19µm болгон, бирок ташуудан кийин 21µm чейин көбөйгөн.
Countstar Rigel тарабынан AdMSCs иммунофенотип аныктоо
AdMSCs иммунофенотип Countstar Rigel тарабынан аныкталган, AdMSCs тиешелүүлүгүнө жараша ар кандай антитело менен инкубацияланган (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Сигнал-түстү колдонуу процедурасы PE флуоресценциясын сүрөттөө үчүн Жашыл каналды жана жаркыраган талааны орнотуу менен түзүлгөн.PE флуоресценция сигналынын үлгүсүн алуу үчүн жаркыраган талаа сүрөтүнүн шилтеме сегментациясы маска катары колдонулган.CD105тин натыйжалары көрсөтүлдү (5-сүрөт).
Сүрөт 5: CD105 AdMSC натыйжалары Countstar Rigel тарабынан аныкталган.A: FCS 5 плюс программалык камсыздоо менен ар кандай үлгүлөрдөгү CD105 оң пайызын сандык талдоо.B: Жогорку сапаттагы сүрөттөр кошумча морфологиялык маалымат менен камсыз кылат.C: Ар бир клетканын эскиздери менен текшерилген натыйжалар, FCS программалык куралдары клеткаларды протеиндин ар кандай экспрессиясына жараша ар кандай топторго бөлгөн.
Башка антителолордун натыйжалары 6-сүрөттө көрсөтүлгөн
6-сүрөт: А: типтүү шпиндель түрүндөгү морфологиясы бар ASCдердин өкүлү.OLYMPUS микроскобу тарабынан тартылган.Баштапкы чоңойтуу, (10x).B: ASCs адипогендик дифференциациясы рутений Кызыл түскө боёлуп, минералдашуу аймактарын көрсөтөт.OLYMPUS микроскобу тарабынан тартылган.Түпнуска чоңойтуу (10x).C: Countstar FL ASCs мүнөздөмөсү.
Кыскача маалымат:
Countstar FL бул сөңгөк клеткаларды өндүрүү жана дифференциациялоо учурунда концентрациясын, жашоого жөндөмдүүлүгүн жана фенотиптин мүнөздөмөлөрүн (жана алардын өзгөрүүлөрүн) көзөмөлдөй алат.FCS экспресс ар бир сигнал уячасын карап чыгуу, сүрөттөлүш аркылуу маалыматтарды текшерүү функциясын берет.Колдонуучу ошондой эле Countstar Rigel жыйынтыктарынын негизинде кийинки эксперименттерди жүргүзүүгө ишене алат.Countstar Rigel өзөк клеткаларынын сапатын көзөмөлдөө үчүн тез, татаал жана ишенимдүү ыкманы сунуш кылат.
