Толук кандагы лейкоциттерди анализдөө клиникалык лабораторияда же кан банкында кадимки анализ болуп саналат.Лейкоциттердин концентрациясы жана жашоо жөндөмдүүлүгү кан сактоонун сапатын көзөмөлдөө үчүн маанилүү көрсөткүч болуп саналат.Лейкоциттерден тышкары, кандын курамында көп сандагы тромбоциттер, кызыл кан клеткалары же клеткалык калдыктар бар, алар микроскоптун же жаркыраган талаа клеткаларынын эсептегичинин астында бүт канды түздөн-түз талдоо мүмкүн эмес.Ак кан клеткаларын эсептөөнүн салттуу ыкмалары РБК лизис процессин камтыйт, бул көп убакытты талап кылат.
AOPI Dual-fluoresces эсептөө клетка концентрациясын жана жашоо жөндөмдүүлүгүн аныктоо үчүн колдонулган анализ түрү болуп саналат.Эритме акридин кызгылт сары (жашыл-флуоресценттик нуклеин кислотасынын боеги) жана пропидий йодидинин (кызыл-флуоресценттик нуклеин кислотасынын боеги) айкалышы.Propidium йодид (PI) акридин апельсин популяциянын бардык клеткаларына кире алат, ал эми кабыкчалары бузулган клеткаларга гана кирүүчү мембрананы жокко чыгаруучу боёк.Эки боёк тең ядродо болгондо, пропидий йодид флуоресценттик резонанстык энергиянын (FRET) өтүшү менен акридин кызгылт сары флуоресценциянын азайышын шарттайт.Натыйжада, кабыкчалары бузулбаган ядролуу клеткалар флуоресценттик жашыл түскө боёп, тирүү деп эсептелет, ал эми мембранасы бузулган ядролуу клеткалар флуоресценттик кызыл түскө гана боёйт жана Countstar® Rigel системасын колдонууда өлүк деп эсептелет.
Countstar Rigel көптөгөн комплекстүү клетка популяциясынын мүнөздөмөлөрү үчүн идеалдуу чечим болуп саналат, бүт кандагы ак кан клеткаларын тез анализдөөгө мүмкүндүк берет.
Эксперименттик процедура:
1. 20 мкл кан үлгүсүн алып, үлгүнү 180 мкл PBS менен суюлтуңуз.
2. 12μl AO/PI эритмесин пипетка менен акырын аралаштырган 12µl үлгүгө кошуңуз;
3.20мкл аралашманы камеранын слайдына тартыңыз;
4.Клеткаларды камерага 1 мүнөткө жакын жайгаштырууга уруксат бериңиз;
Countstar FL инструментине слайдды 5.Insect;
6. "AO/PI Viability" анализин тандап, андан кийин бул үлгү үчүн үлгү ID киргизиңиз.
7. Суюлтуу катышын, Клетканын түрүн тандаңыз, тестти баштоо үчүн 'Run' баскычын чыкылдатыңыз.
Абайлаңыз: AO жана PI потенциалдуу канцероген болуп саналат.Териге жана көзгө түздөн-түз тийбеш үчүн операторго жеке коргонуу шаймандарын (ЖКК) кийүү сунушталат.
Натыйжа:
1. Толук кандын жаркыраган талаа сүрөтү
Толук кандын жаркыраган талаа сүрөттөлүшүндө WBC кызыл кан клеткаларынын арасында көрүнбөйт.(1-сүрөт)
Сүрөт 1 Толук кандын жаркыраган талаа сүрөтү.
2. Толук кандын флуоресценттик сүрөтү
AO жана PI боёгу экөө тең клеткалардын клетка ядросунда ДНКны боёйт.Ошондуктан, тромбоциттер, кызыл кан клеткалары же уюлдук калдыктар лейкоциттердин концентрациясына жана жашоо жөндөмдүүлүгүнө таасирин тийгизе албайт.Жандуу лейкоциттер (Жашыл) жана өлгөн лейкоциттер (Кызыл) флуоресценттик сүрөттөрдө оңой эле көрүнүп турат.(2-сүрөт)
Сүрөт 2 Толук кандын флуоресценттик сүрөттөрү.(А).АО каналынын сүрөтү;(B) PI каналынын сүрөтү;(C) AO жана PI каналынын сүрөттөрүн бириктирүү.
3. Лейкоциттердин концентрациясы жана жашоого жөндөмдүүлүгү
Countstar FL программасы үч камеранын клеткаларын автоматтык түрдө санайт жана WBC клеткаларынын жалпы санынын (1202), концентрациясынын (1,83 x 106 клетка/мл) жана % жашоо жөндөмдүүлүгүнүн (82,04%) орточо маанисин эсептейт.Кошумча анализ же маалыматтарды архивдөө үчүн толук кандын сүрөттөрүн жана маалыматтарын PDF, Сүрөт же Excel катары оңой экспорттоого болот.
Сүрөт 3 Countstar Rigel Программасынын Скриншоту
