Sanguis periphericus cellulae mononucleares (PBMCs) saepe discursum est ad centrifugationem gradientem a toto sanguine separandam.Cellulae illae lymphocytarum (cellulae T, B cellae, NK cellae constant) et monocytae, vulgo in campo immunologiae, therapiae cellae, morbi infectiosi et progressus vaccini utuntur.Vigilantia et examinatio viability et intentio PBMC pendet pro laboratoriis clinicis, investigationis fundamentalis scientiarum medicinae et productionis cellae immunis.
Fig
AOPI Dual-fluoresces computatio est genus primordium adhibitum ad detectionem concentrationis et viability cellularum.Solutio composita ex macula acidi nuclei viridi-fluorescentis (acidi nuclei viridi-fluorescentis) et propidium iodidum (in macula acidi nuclei rubri-fluorescentis).Propidium iodidum est membrana exclusionis tinctura quae cellulas tantum intrat cum membranis suspectis, cum acridine aurantiaco omnes cellulas hominum intrare potest.Cum uterque tincturae in nucleo insunt, propidium iodidum reductionem facit in acridine fluorescentiae aurantiorum per fluorescentiam resonantiae energiae translationis (FRET).Quam ob rem, cellae nucleatae cum membranis integris maculant fluorescentes virides et in vivis aestimantur, cellae autem nucleatae cum membranis suspectis tantum maculae fluorescentes rubrae et mortuae computantur cum systemate FL utens Countstar®.Materia non-nucleata sicut cellae rubrae, platelae et strages non fluorescant et a programmate Countstar® FL neglectae sunt.
De agendi ratione experimentalis:
1. Dilate PBMC specimen in 5 diversis concentratione cum PBS;
2. Adde 12µl AO/PI solutionem in 12µl specimen, cum pipette leniter mixtum;
3. Duc 20µl mixturam in thalamum labi;
4. Permitte cellulas ut in thalamo per singulas 1 minutas consederent;
5.Insect lapsus in Instrumentum Countstar FL;
6. Elige "AO/PI Viability" primordium, deinde experire ab Countstar FL.
Caute AO et PI carcinogenum potentiale est.Commendatur ut auctor utatur personali instrumento tutelae (PPE) ad vitandum directe contactum cum cute et oculis.
Exitus:
1.Bright Field and Fluorescens imagines PBMC
Tinctura AO et PI sunt maculae utriusque DNA in nucleo cellularum cellularum.Propterea elatae, cellulae sanguineae rubrae, vel obstantia cellularum PBMCs concentrationis et viabilitatis eventum afficere nequeunt.Cellulae vivae, cellulae mortuae et strages facile distingui possunt basi in imaginibus ab Countstar FL genitis (Figura 1).
Figura 2．Bright Field and Fluorescens imagines PBMC
2.Concentration et viability PBMC
Specimina PBMC in 2, 4, 8 et 16 temporibus cum PBS diluta sunt, tunc exemplaria illa cum AO/PI mixtione tinguntur et ab respective Countstar FL resolvuntur.Effectus concentrationis et viability ipsius PBMC ut infra figura demonstratur:
