De Countstar System kombinéiert de Bildzytometer an den Zellzähler an en eenzegt Bank-Top Instrument.Dësen Applikatiounsgedriwwenen, kompakten an automatiséierten Zell Imaging System bitt eng alles-an-eent Léisung fir Kriibszellfuerschung, inklusiv Zellzielung, Viabilitéit (AO/PI, Trypanblo), Apoptose (Annexin V-FITC/PI), Zell Zyklus (PI), an GFP / RFP Transfektioun.
Abstrakt
Kriibs ass eng vun den Haaptursaachen vum Doud weltwäit, an d'Entwécklung vun neie Kriibsbehandlungsmethoden ass vu grousser Bedeitung.Kriibszell ass de Basisfuerschungsobjekt vu Kriibs, verschidde Informatioun muss aus der Kriibszell evaluéiert ginn.Dëse Fuerschungsberäich brauch séier, zouverlässeg, einfach an detailléiert Zellanalyse.Countstar System bitt eng einfach Léisungsplattform fir Kriibszellanalyse.
Studéiert Cancer Zell Apoptosis vum Countstar Rigel
Apoptose Assays ginn routinéiert a ville Laboratoiren fir Varietéitzwecker benotzt, vun der Bewäertung vun der Gesondheet vun Zellkulturen bis zur Evaluatioun vun der Toxizitéit vun engem Panel vu Verbindungen.
Apoptosis Assay ass eng Aart déi benotzt gëtt fir den Apoptose Prozentsaz vun Zellen duerch Annexin V-FITC / PI Faarfmethod ze bestëmmen.Annexin V bindt sech un Phosphatidylserin (PS) mat fréi Apoptosezell oder Nekrosezell.PI gitt nëmmen nekrotesch / ganz spéit-Etapp apoptotesch Zellen.(Figur 1)
A: Fréi Apoptose Annexin V (+), PI (-)
B: Spéit Apoptose Annexin V (+), PI (+)
Figur 1: Vergréissert Detailer vu Countstar Rigel Biller (5 x Vergréisserung) vun 293 Zellen, behandelt mat Annexin V FITC a PI
Zell Zyklus Analyse vun Cancer Zell
Den Zellzyklus oder Zell Divisiounszyklus ass d'Serie vun Eventer déi an enger Zell stattfannen, déi zu senger Divisioun an Duplikatioun vu senger DNA (DNA Replikatioun) féieren fir zwou Duechterzellen ze produzéieren.An Zellen mat engem Kär, wéi an Eukaryoten, ass den Zellzyklus och an dräi Perioden opgedeelt: Interphase, déi mitotesch (M) Phase, an Zytokinesis.Propidium Jodid (PI) ass en nukleare Faarffär deen dacks benotzt gëtt fir den Zellzyklus ze moossen.Well d'Faarf net lieweg Zellen erakënnt, ginn d'Zellen mat Ethanol fixéiert virum Färzen.All d'Zellen ginn dann gefierft.Zellen, déi sech op Divisioun virbereeden, enthalen ëmmer méi Quantitéiten un DNA a weisen proportional erhéicht Fluoreszenz.Differenzen an der Fluoreszenzintensitéit gi benotzt fir de Prozentsaz vun Zellen an all Phase vum Zellzyklus ze bestëmmen.Countstar kann d'Bild erfaassen an d'Resultater ginn an der FCS Express Software ugewisen.(Figur 2)
Figur 2: MCF-7 (A) an 293T (B) sech mat Zell Zyklus Detectioun Kit mat PI Kierchefënster, d'Resultater sech duerch Countstar Rigel, an analyséiert vun FCS auszedrécken.
Viabilitéit a GFP Transfektiounsbestëmmung an Zell
Wärend dem Bioprozess gëtt GFP dacks benotzt fir mat rekombinantem Protein als Indikator ze fusionéieren.Bestëmmen der GFP fluorescent kann den Zil- Protein Ausdrock reflektéiert.Countstar Rigel bitt e séieren an einfachen Assay fir d'GFP Transfektioun ze testen souwéi d'Viabilitéit.Zellen sech mat Propidium Jodid (PI) an Hoechst 33342 Kierchefënster der dout Zell Populatioun an total Zell Populatioun ze definéieren.Countstar Rigel bitt eng séier, quantitativ Method fir GFP Ausdrock Effizienz a Viabilitéit zur selwechter Zäit ze evaluéieren.(Figur 4)
Figur 4: Zellen sinn benotzt Hoechst 33342 (blo) lokaliséiert an de Prozentsaz vun GFP auszedrécken Zellen (gréng) kann einfach bestëmmt ginn.Nonviable Zelle si mat Propidiumjodid (PI; rout) gefierft.
Viabilitéit an Zellzuel
AO / PI Dual-Fluoreszenzzielung ass den Assay-Typ benotzt fir Zellkonzentratioun, Viabilitéit z'entdecken.Et ass opgedeelt an Zelllinnzielung a Primärzellzielung no verschidden Zellarten.D'Léisung enthält eng Kombinatioun vun der gréng-fluorescent Nukleinsäure stain, acridine orange, an der redfluorescent Nukleinsäure stain, propidium iodide.Propidium Jodid ass e Membran Ausgrenzungsfär deen nëmmen Zellen mat kompromittéierte Membranen erakënnt, während Acridin orange all Zellen an enger Populatioun penetréiert.Wa béid Faarfstoffer am Kär präsent sinn, verursaacht Propidiumjodid eng Reduktioun vun der Acridin orange Fluoreszenz duerch Fluoreszenz Resonanz Energie Transfert (FRET).Als Resultat, nukleéiert Zellen mat intakte Membranen fluoreszent gréng a ginn als lieweg gezielt, wärend nukleéiert Zellen mat kompromittéierte Membranen nëmmen fluoreszent rout flecken an als dout gezielt ginn wann Dir de Countstar Rigel System benotzt.Net-nukleéiert Material wéi rout Bluttzellen, Plättchen a Schutt fluoreszen net a gi vun der Countstar Rigel Software ignoréiert.(Figur 5)
Figur 5: Countstar huet eng duebel-fluorescence staining Method fir einfach, genee Bestëmmung vun PBMC Konzentratioun a Viabilitéit optimiséiert.Echantillon gefierft mat AO / PI kënne mat der Counstar Rigel analyséiert ginn
