Abstrakt: Mesenchymal Stammzellen sinn eng Ënnergrupp vu pluripotenten Stammzellen déi aus dem Mesoderm isoléiert kënne ginn.Mat hirer Selbstreplikatioun Erneierung a Multi-Direktioun Differenzéierungseigenschaften, besëtzen se en héije Potenzial fir verschidde Therapien an der Medizin.Mesenchymal Stammzellen hunn en eenzegaartegen Immunphenotyp an Immunreguléierungsfäegkeet.Dofir gi mesenchymal Stammzellen scho wäit an Stammzelltransplantatiounen, Tissuetechnik an Organtransplantatioun benotzt.A Nieft dësen Uwendungen gi se als idealt Tool an der Tissuetechnik als Seederzellen an enger Serie vu Basis- a klineschen Fuerschungsexperimenter benotzt.Bis elo gëtt et keng allgemeng akzeptéiert Method a Standard fir d'Qualitéitskontroll vu mesenchymal Stammzellen.De Countstar Rigel kann d'Konzentratioun, d'Viabilitéit an d'Phänotypeigenschaften (an hir Ännerungen) während der Produktioun an der Differenzéierung vun dëse Stammzellen iwwerwaachen.De Countstar Rigel huet och de Virdeel fir zousätzlech morphologesch Informatioun ze kréien, déi vun de permanenten Hellfeld a Fluoreszenz-baséiert Bildopname während dem ganze Prozess vun der Zellqualitéit Iwwerwaachung zur Verfügung gestallt gëtt.De Countstar Rigel bitt eng séier, raffinéiert an zouverlässeg Method fir d'Qualitéitskontroll vu Stammzellen.
Material a Methoden:
Adipose-ofgeleet mesenchymal Stammzellen (AdMSCs) goufe vum Professer Nianmin Qi, AO / PI Faarfléisung (Shanghai RuiYu, CF002) geschenkt.Antikörper: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs goufen an engem 37 ℃, 5% CO2 befeuchtte Inkubator kultivéiert.Verdauen mat Trypsin virum Gebrauch.
CD Marker staining Prozedur war als Handbuch vun antibody gefollegt.
CD Marker Detektioun mat Countstar Rigel:
1. Eng Signalfaarf-Applikatiounsprozedur gouf erstallt andeems de PE-Kanal op d'Bild PE-Fluoreszenz gesat gouf.
2. 3 Felder goufen aus all Chamber ageholl.
3. No der Imaging an der initialer Analyse fäerdeg waren, gouf d'Schwell (Logpaart) Astellung fir positiv an negativ Transfektioun vun der FCS Software festgeluecht.
Qualitéitskontroll vun Stammzellen
Déi folgend Figur (Dorënner 1) weist d'Prozedur vun Stammzelltherapie .
Figur 1: D'Prozedur fir Stammzelltherapie
Resultater:
Bestëmmung vun der Konzentratioun, Viabilitéit, Duerchmiesser an Aggregatioun vun AdMSCs.
D'Viabilitéit vun AdMSCs gouf vun AO /PI bestëmmt, Eng Dual-Faarf Uwendungsprozedur gouf erstallt andeems Dir Green Channel a Red Channel op Bild AO a PI Fluoreszenz setzt, plus en helle Feld.Beispill Biller goufen an der Figur 2 gewisen.
Figur 2. Biller vun virun Transport an no Transport vun AdMSCs.A. Virum Transport;e representativ Bild gëtt gewisen.B. Nom Transport;e representativ Bild gëtt gewisen.
D'Viabilitéit vun AdMSCs gouf nom Transport drastesch geännert am Verglach mam virum Transport.D'Viabilitéit virum Transport war 92%, awer et reduzéiert op 71% nom Transport.D'Resultat gouf an der Figur 3 gewisen.
Figur 3. D'Viabilitéitsresultater vun AdMSCs (virum Transport an nom Transport)
Den Duerchmiesser an d'Aggregatioun goufen och vum Countstar Rigel bestëmmt.Den Duerchmiesser vun AdMSCs gouf nom Transport drastesch geännert am Verglach mam virum Transport.Den Duerchmiesser virum Transport war 19µm, awer et ass op 21µm nom Transport eropgaang.D'Aggregatioun vu virum Transport war 20%, awer et ass op 25% nom Transport eropgaang.Vun de Biller, déi vum Countstar Rigel ageholl goufen, gouf de Phänotyp vun AdMSCs drastesch nom Transport geännert.D'Resultater goufen an der Figur 4 gewisen.
Figur 4: Den Duerchmiesser an Aggregatioun Resultater.A: Déi representativ Biller vun AdMSCs, de Phänotyp vun AdMSCs goufen nom Transport drastesch geännert.B: D'Aggregatioun virum Transport war 20%, awer et ass op 25% nom Transport eropgaang.C: Den Duerchmiesser virum Transport war 19μm, awer et ass op 21μm nom Transport eropgaang.
Bestëmmt den Immunophenotyp vun AdMSCs vum Countstar Rigel
D'immunophenotype vun AdMSCs sech duerch Countstar Rigel bestëmmt, AdMSCs sech mat verschiddenen antibody incubated bzw. (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Eng Signalfaarfapplikatiounsprozedur gouf erstallt andeems e grénge Kanal fir d'PE-Fluoreszenz ze bilden, plus en hellt Feld.Hell Feld Bild Referenz Segmentatioun gouf als Mask applizéiert fir de PE Fluoreszenz Signal ze probéieren.D'Resultater vun CD105 goufen gewisen (Dorënner 5).
Figur 5: CD105 Resultater vun AdMSCs sech duerch Countstar Rigel bestëmmt.A: Quantitativ Analyse vum positive Prozentsaz vun CD105 a verschiddene Proben duerch FCS Express 5 Plus Software.B: Héichqualitativ Biller liwweren zousätzlech morphologesch Informatioun.C: Validéiert Resultater duerch Thumbnails vun all eenzel Zell, d'FCS Software Tools hunn d'Zellen a verschidde Gruppen opgedeelt no hirem variéierende Proteinausdrock.
Aner Antikörper Resultater goufen an der Fig 6 gewisen
Figur 6: A: E representativt Bild vun ASCs mat typesch spindle-gebuerene Morphologie.Gefangen duerch OLYMPUS Mikroskop.Original Vergréisserung, (10x).B: Adipogen Differenzéierung vun ASCs gëtt bewisen duerch Ruthenium Red Faarfing déi Gebidder vun der Mineraliséierung weist.Gefangen duerch OLYMPUS Mikroskop.Original Vergréisserung (10x).C: Countstar FL Charakteriséierung vun ASCs.
Resumé:
De Countstar FL kann d'Konzentratioun, d'Viabilitéit an d'Phänotypeigenschaften (an hir Ännerungen) während der Produktioun an der Differenzéierung vun dëse Stammzellen iwwerwaachen.FCS Express liwwert d'Funktioun fir all Signalzell ze iwwerpréiwen, d'Donnéeën duerch d'Bild ze validéieren.De Benotzer kann och d'Vertrauen hunn déi nächst Experimenter auszeféieren baséiert op Countstar Rigel Resultater.De Countstar Rigel bitt eng séier, raffinéiert an zouverlässeg Method fir d'Qualitéitskontroll vu Stammzellen.
