Santrauka: Mezenchiminės kamieninės ląstelės yra pluripotentinių kamieninių ląstelių pogrupis, kurį galima išskirti iš mezodermos.Dėl savaiminio replikacijos atsinaujinimo ir daugiakrypčių diferenciacijos savybių jie turi didelį įvairių gydymo būdų potencialą medicinoje.Mezenchiminės kamieninės ląstelės turi unikalų imuninį fenotipą ir imuninės sistemos reguliavimo gebėjimą.Todėl mezenchiminės kamieninės ląstelės jau plačiai naudojamos atliekant kamieninių ląstelių transplantaciją, audinių inžineriją ir organų transplantaciją.Be šių programų, jie naudojami kaip ideali priemonė audinių inžinerijoje kaip sėjamosios ląstelės atliekant pagrindinius ir klinikinius tyrimų eksperimentus.Iki šiol nėra plačiai priimto mezenchiminių kamieninių ląstelių kokybės kontrolės metodo ir standarto.Countstar Rigel gali stebėti šių kamieninių ląstelių koncentraciją, gyvybingumą ir fenotipo charakteristikas (ir jų pokyčius) gaminant ir diferencijuojant šias kamienines ląsteles.„Countstar Rigel“ taip pat turi pranašumą, nes per visą ląstelių kokybės stebėjimo procesą gaunama papildoma morfologinė informacija, kurią teikia nuolatiniai šviesaus lauko ir fluorescenciniai vaizdo įrašai.Countstar Rigel siūlo greitą, sudėtingą ir patikimą kamieninių ląstelių kokybės kontrolės metodą.
Medžiagos ir metodai:
Iš riebalų gautas mezenchimines kamienines ląsteles (AdMSC) padovanojo profesorius Nianmin Qi, AO / PI dažymo tirpalas (Shanghai RuiYu, CF002).Antikūnai: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD kompanija).
AdMSC buvo auginami 37 ℃, 5% CO2 drėkintame inkubatoriuje.Prieš naudojimą suvirškinti tripsinu.
CD žymeklio dažymo procedūra buvo vykdoma kaip antikūnų vadovas.
CD žymeklio aptikimas naudojant Countstar Rigel:
1. Sukurta signalo spalvos taikymo procedūra, nustatant PE kanalą į vaizdo PE fluorescenciją.
2. Iš kiekvienos kameros buvo paimti 3 laukai.
3. Baigus vaizdavimą ir pradinę analizę, FCS programinė įranga buvo nustatyta teigiamos ir neigiamos transfekcijos slenksčio (logo vartų) nustatymas.
Kamieninių ląstelių kokybės kontrolė
Toliau pateiktame paveikslėlyje (1 pav.) parodyta procedūra kamieninių ląstelių terapija .
1 pav. Kamieninių ląstelių terapijos procedūra
Rezultatai:
AdMSC koncentracijos, gyvybingumo, skersmens ir agregacijos nustatymas.
AdMSC gyvybingumas buvo nustatytas naudojant AO / PI. Buvo sukurta dviejų spalvų taikymo procedūra, nustatant žalią kanalą ir raudoną kanalą į vaizdo AO ir PI fluorescenciją bei ryškų lauką.Vaizdų pavyzdžiai parodyti 2 paveiksle.
2 pav. AdMSC vaizdai prieš transportavimą ir po transportavimo.A. Prieš transportavimą;rodomas reprezentacinis vaizdas.B. Po transportavimo;rodomas reprezentacinis vaizdas.
AdMSC gyvybingumas po transportavimo labai pasikeitė, palyginti su prieš transportavimą.Gyvybingumas prieš transportavimą buvo 92%, bet po transportavimo sumažėjo iki 71%.Rezultatas parodytas 3 paveiksle.
3 pav. AdMSC gyvybingumo rezultatai (prieš transportavimą ir po transportavimo)
Skersmenį ir agregaciją taip pat nustatė Countstar Rigel.AdMSC skersmuo buvo drastiškai pakeistas po transportavimo, palyginti su prieš transportavimą.Skersmuo prieš transportavimą buvo 19 µm, tačiau po transportavimo jis padidėjo iki 21 µm.Sumavimas prieš transportavimą sudarė 20 proc., tačiau po transportavimo jis padidėjo iki 25 proc.Iš Countstar Rigel užfiksuotų vaizdų AdMSC fenotipas po transportavimo buvo smarkiai pakeistas.Rezultatai parodyti 4 paveiksle.
4 pav. Skersmuo ir agregacijos rezultatai.A: reprezentatyvūs AdMSC vaizdai, AdMSC fenotipas po transportavimo buvo drastiškai pakeisti.B: Sumavimas prieš transportavimą buvo 20%, bet po transportavimo jis padidėjo iki 25%.C: Skersmuo prieš transportavimą buvo 19 µm, bet po transportavimo jis padidėjo iki 21 µm.
Countstar Rigel nustatykite AdMSC imunofenotipą
AdMSC imunofenotipas buvo nustatytas Countstar Rigel, AdMSC buvo atitinkamai inkubuojami su skirtingais antikūnais (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Signalo spalvų taikymo procedūra buvo sukurta nustatant žalią kanalą vaizdo PE fluorescencijai ir ryškų lauką.Ryškaus lauko vaizdo atskaitos segmentavimas buvo pritaikytas kaip kaukė PE fluorescencijos signalui paimti.Buvo parodyti CD105 rezultatai (5 pav.).
5 pav. AdMSC CD105 rezultatus nustatė Countstar Rigel.A: Kiekybinė teigiamo CD105 procento skirtinguose mėginiuose analizė naudojant FCS express 5 plus programinę įrangą.B: Aukštos kokybės vaizdai suteikia papildomos morfologinės informacijos.C: Patvirtinti rezultatai pagal kiekvienos ląstelės miniatiūras, FCS programinės įrangos įrankiai suskirstė ląsteles į skirtingas grupes pagal jų skirtingą baltymų ekspresiją.
Kiti antikūnų rezultatai parodyti 6 pav
6 paveikslas: A: tipiškas verpstės formos morfologijos ASC vaizdas.Užfiksuota OLYMPUS mikroskopu.Originalus padidinimas (10x).B: Adipogeninę ASC diferenciaciją įrodo rutenio raudonasis dažymas, rodantis mineralizacijos sritis.Užfiksuota OLYMPUS mikroskopu.Originalus padidinimas (10x).C: Countstar FL ASC apibūdinimas.
Santrauka:
Countstar FL gali stebėti koncentraciją, gyvybingumą ir fenotipo charakteristikas (ir jų pokyčius) šių kamieninių ląstelių gamybos ir diferenciacijos metu.FCS express suteikia funkciją peržiūrėti kiekvieną signalo ląstelę, patvirtinti duomenis per vaizdą.Vartotojas taip pat gali pasitikėti, kad atliks kitus eksperimentus, pagrįstus Countstar Rigel rezultatais.Countstar Rigel siūlo greitą, sudėtingą ir patikimą kamieninių ląstelių kokybės kontrolės metodą.
