AOPI dvigubo fluorescencijos skaičiavimas yra tyrimo tipas, naudojamas ląstelių koncentracijai ir gyvybingumui nustatyti.Tirpalas yra akridino oranžinės spalvos (žaliai fluorescencinės nukleorūgšties dėmės) ir propidžio jodido (raudonai fluorescuojančios nukleorūgšties dėmės) derinys.Propidžio jodidas (PI) yra membraną išskiriantys dažai, kurie patenka tik į ląsteles, kurių membranos pažeistos, o akridino apelsinas gali prasiskverbti į visas populiacijos ląsteles.Kai branduolyje yra abiejų dažiklių, propidžio jodidas sumažina akridino oranžinės spalvos fluorescenciją dėl fluorescencinio rezonanso energijos perdavimo (FRET).Dėl to branduolinės ląstelės su nepažeistomis membranomis nusidažo fluorescuojančia žalia spalva ir yra skaičiuojamos kaip gyvos, o branduolinės ląstelės su pažeistomis membranomis nusidažo tik fluorescuojančia raudona spalva ir, naudojant Countstar® FL sistemą, skaičiuojamos kaip negyvos.Nebranduolinės medžiagos, tokios kaip raudonieji kraujo kūneliai, trombocitai ir šiukšlės, nefluorescuoja ir Countstar® FL programinė įranga nepaiso.
Kamieninių ląstelių terapijos procesas
4 pav. Mezenchiminių kamieninių ląstelių (MSC) gyvybingumo ir ląstelių skaičiaus stebėjimas, skirtas naudoti ląstelių terapijoje.
Nustatykite MSC gyvybingumą AO/PI ir Trypan Blue testu
2 pav. A. MSC vaizdas, nudažytas AO/PI ir Trypan Blue;2. AO/PI ir Trypan blue rezultato palyginimas prieš ir po transportavimo.
Ląstelių lūžio rodiklis keičiasi, dažymas Trypan Blue nebuvo toks akivaizdus, sunku nustatyti gyvybingumą po transportavimo.Dviejų spalvų fluorescencija leidžia nudažyti gyvas ir negyvas ląsteles su branduoliais, todėl gaunami tikslūs gyvybingumo rezultatai, net jei yra šiukšlių, trombocitų ir raudonųjų kraujo kūnelių.
