Ko te punaha Countstar e whakakotahi ana i te taima atahanga me te porotiti pūtau ki roto i tetahi taputapu pae-runga kotahi.Ko tenei punaha whakaata-a-taua-a-a-tono, kiato, me te aunoa e whakarato ana i te otinga katoa-i-kotahi mo te rangahau pūtau mate pukupuku, tae atu ki te tatau pūtau, te kaha (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), pūtau huringa (PI), me te whakawhitinga GFP/RFP.
Putanga
Ko te mate pukupuku tetahi o nga tino take e mate ai te ao, a, he mea nui te whanaketanga o nga tikanga maimoatanga mate pukupuku hou.Ko te pūtau mate pukupuku te kaupapa rangahau matua o te mate pukupuku, he maha nga korero me arotake mai i te pukupuku pukupuku.Ko tenei waahanga rangahau me tere, pono, ngawari, me te kiko o te tātari pūtau.Ko te punaha Countstar he papa otinga ngawari mo te tātari pūtau mate pukupuku.
Akohia te Apoptosis Cell Cancer na Countstar Rigel
Ka whakamahia nga whakamatautau apoptosis i roto i nga whare taiwhanga maha mo nga kaupapa rereke mai i te aromatawai i te hauora o nga ahurea pūtau tae noa ki te aromatawai i te paitini o te roopu o nga pūhui.
Ko te Apoptosis assay he momo e whakamahia ana hei whakatau i te paheketanga apoptosis o nga pūtau ma te tikanga whakapouri a Annexin V-FITC/PI.Ko te Annexin V e herea ana ki te phosphatidylserine (PS) me te apoptosis wawe o te pūtau necrosis ranei.Ko te PI anake ka uru ki roto i nga pūtau necrotic/tino mutunga o te wahanga apoptotic.(Whakaahua 1)
A: Apoptosis wawe Annexin V (+), PI (-)
B: Te mutunga o te apoptosis Annexin V (+), PI (+)
Whakaahua1: Ko nga korero whakahiahia o nga pikitia Countstar Rigel (5 x te whakanui) o te 293 nga pūtau, he mea rongoa ki te Annexin V FITC me te PI
Te Taatari Hurihanga Waea o te Putau Mate pukupuku
Ko te huringa pūtau, ko te huringa wehenga pūtau ranei ko te raupapa o nga huihuinga ka puta i roto i te pūtau e ahu atu ana ki tana wehenga me te tāruaruatanga o tana DNA (te tukurua DNA) ki te whakaputa i nga pūtau tamahine e rua.I roto i nga pūtau whai karihi, pera i nga eukaryotes, ka wehewehea te huringa o te pūtau ki nga wahanga e toru: te wahanga, te wahanga mitotic (M), me te cytokinesis.Ko te Propidium iodide (PI) he waikano whakapouri karihi e whakamahia ana ki te ine i te huringa pūtau.Na te mea kaore e taea e te waikano te uru ki roto i nga pūtau ora, ka whakatauhia nga ruma ki te waihano i mua i te whakapouri.Kātahi ka pokea ngā pūtau katoa.Ko nga pūtau e whakareri ana mo te wehewehenga ka nui ake te DNA me te whakaatu i te pikinga o te rangi.Ka whakamahia nga rereketanga o te kaha o te rewharewha ki te whakatau i te ōrau o ngā pūtau i ia wahanga o te huringa pūtau.Ka taea e Countstar te hopu i te ahua, ka whakaatuhia nga hua ki roto i te rorohiko whakaatu FCS.(Whakaahua 2)
Whakaatu 2: Ko te MCF-7 (A) me te 293T (B) i pania ki te Kete Tirohanga huringa pūtau me te PI, ko nga hua i whakatauhia e Countstar Rigel, ka tātarihia e te FCS express.
Te Whakaaetanga me te Whakatau Whakawhitinga GFP i roto i te Pūtau
I te wa o te tukanga koiora, ka whakamahia te GFP ki te whakakotahi me te pūmua recombinant hei tohu.Whakatauhia te GFP ka taea te whakaata i te korero pūmua.Ka tukuna e Countstar Rigel he whakamatautau tere me te ngawari mo te whakamatautau i te whakawhitinga GFP tae atu ki te oranga.I poke nga pūtau ki te Propidium iodide (PI) me te Hoechst 33342 hei tautuhi i te taupori pūtau mate me te taupori pūtau katoa.Ka tukuna e Countstar Rigel he tikanga tere, ine nui mo te arotake i te pai o te whakapuaki GFP me te whai oranga i te wa ano.(Whakaahua 4)
Whakaatu 4: Kei te noho nga pūtau ma te whakamahi i te Hoechst 33342 (puru) ka taea te whakatau i te ōrau o te GFP e whakaatu ana i nga pūtau (matomato).Ka pokea te pūtau kore e taea ki te propidium iodide (PI; whero).
Te Maumau me te Tatau Pūtau
Ko te tatau AO/PI Dual-fluoresces te momo whakamatautau e whakamahia ana mo te kimi i te kukū pūtau, te oranga.Kua wehea ki te tatau raina pūtau me te tatau pūtau tuatahi i runga i nga momo pūtau rereke.Kei roto i te otinga he huinga o te waikawa karihi kaakaariki-maamaa, te karaka acridine, me te waikawa karihi whero, te propidium iodide.Ko te Propidium iodide he waikano whakakore kiripi ka uru noa ki roto i nga pūtau me nga kiriuhi taupatupatu i te wa ka uru te karaka acridine ki roto i nga pūtau katoa o te taupori.Ina noho nga waikano e rua i roto i te karihi, ko te propidium iodide te whakahekenga o te acridine karaka karaka na roto i te whakawhiti hiko resonance resonance (FRET).Ko te mutunga mai, ka pokea nga pūtau karihi me nga kiriuhi mau tonu i te kaakaariki ka kiia he ora, engari ko nga pūtau karihi me nga kiriuhi taupatupatu ka pokea noa te whero karekau ka kiia kua mate ina whakamahi i te punaha Countstar Rigel.Ko nga mea kore-karohia penei i nga toto toto whero, nga pereti me nga otaota e kore e rere ana, e kore e arohia e te rorohiko Countstar Rigel.(Whakaahua 5)
Whakaahua 5: Kua arotauhia e Countstar tetahi tikanga whakapouri-rua mo te ngawari, te whakatau tika o te kukū me te oranga o te PBMC.Ko nga tauira kua pania ki te AO/PI ka taea te tātari me te Counstar Rigel
