Ko nga pūtau mononuclear toto peripheral (PBMCs) ka tukatukahia kia wehea mai i te toto katoa na roto i te raupatu rōnaki kiato.Ko aua pūtau he lymphocytes (nga pūtau T, pūtau B, pūtau NK) me te monocytes, e whakamahia nuitia ana i roto i te mara o te mate mate, te rongoa pūtau, te mate hopuhopu me te whanaketanga kano kano.Ko te aro turuki me te tātari i te kaha me te kukū o te PBMC he mea nui mo nga taiwhanga haumanu, rangahau putaiao rongoa taketake me te hanga pūtau aukati.
Whakaahua 1. Ko te PBMC kua wehea mai i te toto hou me te Rōnaki Rōnaki Rōnaki
Ko te tatau AOPI Dual-fluoresces te momo whakamatautau e whakamahia ana hei kimi i te kukū o te pūtau me te oranga.Ko te otinga ko te whakakotahitanga o te karaka acridine (te waikawa nucleic waikawa kaakaaka) me te propidium iodide (te waikawa nucleic waikawa whero-whero).Ko te Propidium iodide (PI) he waikano whakakore kiriuhi ka uru noa ki roto i nga pūtau me nga kiriuhi taupatupatu, i te mea ka taea e te karaka acridine te uru ki roto i nga pūtau katoa o te taupori.Ina noho nga waikano e rua i roto i te karihi, ko te propidium iodide te whakahekenga o te acridine karaka karaka na roto i te whakawhiti hiko resonance resonance (FRET).Ko te mutunga mai, ka pokea te kaakaariki kaakaariki ka kiia ko nga pūtau karihi me nga kiriuhi taupatupatu ka pokea he whero karaka ka kiia kua mate ina whakamahi i te punaha Countstar® FL.Ko nga mea kore-karohia penei i nga toto toto whero, nga pereti me nga otaota e kore e rere ana, e kore e arohia e te rorohiko Countstar® FL.
Tikanga Whakamatau:
1.Dilute te tauira PBMC ki 5 rerekē kukū ki PBS;
2. Tāpirihia he otinga 12µl AO/PI ki roto i te tauira 12µl, ka ata konatunatua ki te pipette;
3. Tuhia te ranunga 20µl ki te kiriata ruma;
4. Tukua nga ruma kia noho ki roto i te ruma mo te 1 meneti;
5. Pepeke te kiriata ki te taputapu Countstar FL;
6. Whiriwhiria te "AO/PI Viability", ka whakamatauhia e Countstar FL.
Whakatupato: Ko te AO me te PI he mate mate pukupuku pea.E taunaki ana kia mau te kaiwhakahaere i nga taputapu whakamarumaru whaiaro (PPE) kia kore e pa ki te kiri me nga kanohi.
Hua:
1.Bright Field me nga whakaahua Fluorescence o te PBMC
Ko te waikano AO me te PI he poke DNA i roto i te karihi o nga pūtau.Na reira, karekau e taea e nga Platelet, nga toto toto whero, nga otaota pūtau te pa ki te kukū o te PBMC me te hua oranga.Ko nga pūtau ora, nga pūtau mate me nga otaota ka taea te wehewehe i runga i nga whakaahua i hangaia e Countstar FL (Whakaahua 1).
Whakaahua 2．Ara kanapa me nga whakaahua Fluorescence o te PBMC
2.Ko te Concentration me te Viability o te PBMC
I waimeha nga tauira PBMC i te 2, 4, 8 me te 16 nga wa ki te PBS, katahi ka whakakororia aua tauira ki te ranunga tae AO/PI ka tātarihia e Countstar FL.Ko te hua o te kukū me te oranga o te PBMC e whakaatuhia ana i raro nei te ahua:
