Системот Countstar ги комбинира цитометарот на сликата и бројачот на ќелиите во еден инструмент на клупата.Овој компактен и автоматизиран систем за сликање на клетките управуван од апликации, обезбедува се-во-едно решение за истражување на клетките на ракот, вклучувајќи броење клетки, одржливост (AO/PI, трипан сино), апоптоза (Annexin V-FITC/PI), клетка циклус (PI) и GFP/RFP трансфекција.
Апстракт
Ракот е една од главните причини за смрт во светот, а развојот на нови методи за лекување на ракот е од големо значење.Клетката на ракот е основен истражувачки објект на ракот, различни информации треба да се проценат од клетката на ракот.Оваа област на истражување има потреба од брза, сигурна, едноставна и детална анализа на клетките.Countstar системот обезбедува едноставна платформа за решение за анализа на клетките на ракот.
Проучете ја апоптозата на клетките на ракот од Countstar Rigel
Тестовите за апоптоза рутински се користат во многу лаборатории за различни цели, од проценка на здравјето на клеточните култури до проценка на токсичноста на панел соединенија.
Анализата на апоптоза е тип кој се користи за одредување на процентот на апоптоза на клетките со методот на боење со Annexin V-FITC/PI.Анексин V се врзува за фосфатидилсерин (PS) со рана апоптоза или клетка на некроза.ПИ навлегува само во некротични/многу доцна фаза на апоптотични клетки.(Слика 1)
О: Рана апоптоза Анексин V (+), PI (-)
Б: Доцна апоптоза Анексин V (+), PI (+)
Слика 1: Зголемени детали за сликите на Countstar Rigel (5 x зголемување) од 293 клетки, третирани со Annexin V FITC и PI
Анализа на клеточниот циклус на клетките на ракот
Клеточниот циклус или циклусот на клеточна делба е серија на настани што се случуваат во клетката што доведува до нејзина поделба и дуплирање на нејзината ДНК (репликација на ДНК) за да се произведат две ќерки-ќерки.Во клетките со јадро, како и кај еукариотите, клеточниот циклус е исто така поделен на три периоди: интерфаза, митотична (М) фаза и цитокинеза.Пропидиум јодид (PI) е нуклеарна боја за боење која често се користи за мерење на клеточниот циклус.Бидејќи бојата не може да влезе во живи клетки, клетките се фиксираат со етанол пред боење.Сите клетки потоа се обоени.Клетките кои се подготвуваат за поделба ќе содржат зголемени количини на ДНК и ќе прикажуваат пропорционално зголемена флуоресценција.Разликите во интензитетот на флуоресценцијата се користат за да се одреди процентот на клетки во секоја фаза од клеточниот циклус.Countstar може да ја сними сликата и резултатите ќе бидат прикажани во софтверот FCS express.(Слика 2)
Слика 2: MCF-7 (A) и 293T (B) беа обоени со комплет за откривање клеточен циклус со PI, резултатите беа одредени со Countstar Rigel и анализирани со FCS express.
Одржливост и определување на трансфекција на GFP во клетката
За време на биопроцесот, GFP често се користи за спојување со рекомбинантен протеин како индикатор.Определете го GFP флуоресцентниот може да ја рефлектира целната протеинска експресија.Countstar Rigel нуди брза и едноставна анализа за тестирање на трансфекција на GFP, како и одржливост.Клетките беа обоени со пропидиум јодид (PI) и Hoechst 33342 за да се дефинира популацијата на мртвите клетки и вкупната клеточна популација.Countstar Rigel нуди брз, квантитативен метод за евалуација на ефикасноста и одржливоста на изразувањето на GFP во исто време.(Слика 4)
Слика 4: Клетките се лоцирани со помош на Hoechst 33342 (сина) и процентот на клетки што изразуваат GFP (зелена) лесно може да се одреди.Незавидните клетки се обоени со пропидиум јодид (PI; црвено).
Одржливост и број на клетки
Броење со двојна флуоресцена AO/PI е тип на анализа што се користи за откривање на клеточната концентрација, одржливост.Се дели на броење клеточни линии и примарно броење на клетки според различни типови на клетки.Растворот содржи комбинација од дамка од зелено-флуоресцентна нуклеинска киселина, акридин портокалова и црвенофлуоресцентна боја на нуклеинска киселина, пропидиум јодид.Пропидиум јодид е боја за исклучување на мембраната која влегува само во клетките со компромитирани мембрани додека акридин портокалот продира во сите клетки во популацијата.Кога двете бои се присутни во јадрото, пропидиум јодид предизвикува намалување на флуоресценцијата на акридин портокаловата флуоресценција со пренос на енергија со флуоресцентна резонанца (FRET).Како резултат на тоа, нуклеарните клетки со недопрени мембрани обојуваат флуоресцентно зелено и се бројат како живи, додека нуклеарните клетки со компромитирани мембрани обојуваат само флуоресцентно црвено и се бројат како мртви кога се користи системот Countstar Rigel.Материјалот без јадра како што се црвените крвни зрнца, тромбоцитите и остатоците не флуоресираат и се игнорирани од софтверот Countstar Rigel.(Слика 5)
Слика 5: Countstar оптимизираше метод на боење со двојна флуоресценција за едноставно, прецизно одредување на концентрацијата и одржливоста на PBMC.Примероците обоени со AO/PI може да се анализираат со Counstar Rigel
