Апстракт: Мезенхималните матични клетки се подгрупа на плурипотентни матични клетки кои можат да се изолираат од мезодермот.Со нивните карактеристики за обновување само-репликација и повеќенасочна диференцијација, тие поседуваат висок потенцијал за различни терапии во медицината.Мезенхималните матични клетки имаат уникатен имунолошки фенотип и способност за имунорегулација.Затоа, мезенхималните матични клетки веќе се широко користени во трансплантација на матични клетки, инженерство на ткива и трансплантација на органи.И покрај овие апликации, тие се користат како идеална алатка во инженерството на ткиво како клетки за сеење во серија основни и клинички истражувачки експерименти.Досега не постои широко прифатен метод и стандард за контрола на квалитетот на мезенхималните матични клетки.Countstar Rigel може да ја следи концентрацијата, одржливоста и карактеристиките на фенотипот (и нивните промени) за време на производството и диференцијацијата на овие матични клетки.Countstar Rigel исто така има предност во добивањето дополнителни морфолошки информации, обезбедени од трајното светло поле и снимките на слики базирани на флуоресценција за време на целиот процес на следење на квалитетот на ќелијата.Countstar Rigel нуди брз, софистициран и сигурен метод за контрола на квалитетот на матичните клетки.
Материјали и методи:
Мезенхималните матични клетки добиени од маснотии (AdMSCs) беа подарени од професорот Нианмин Чи, раствор за боење AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Антитела: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs беа култивирани во 37℃, 5% CO2 навлажнет инкубатор.Вари со трипсин пред употреба.
Постапката за боење со ЦД маркер беше следена како прирачник за антитела.
Откривање на ЦД-маркер со Countstar Rigel:
1. Создадена е процедура за примена на боја на сигнал со поставување на PE каналот да слика PE флуоресценција.
2. Од секоја комора беа заробени 3 полиња.
3. По завршувањето на снимањето и првичната анализа, поставката за праг (лог порта) за позитивна и негативна трансфекција беше поставена со софтверот FCS.
Контрола на квалитетот на матичните клетки
На следната слика (слика 1) е прикажана постапката на терапија со матични клетки .
Слика 1: Постапката за терапија со матични клетки
Резултати:
Одредување на концентрацијата, одржливоста, дијаметарот и агрегацијата на AdMSCs.
Одржливоста на AdMSCs беше одредена со AO/PI, Креирана е процедура за апликација со двојна боја со поставување на Зелен канал и Црвен канал на слика AO и PI флуоресценција, плус светло поле.Примери на слики беа прикажани на Слика 2.
Слика 2. Слики од пред транспортот и по транспортот на AdMSCs.A. Пред транспортот;е прикажана репрезентативна слика.Б. По транспортот;е прикажана репрезентативна слика.
Одржливоста на AdMSC беше драстично променета по транспортот во споредба со пред транспортот.Одржливоста пред транспортот беше 92%, но се намали на 71% по транспортот.Резултатот беше прикажан на слика 3.
Слика 3. Резултати за одржливост на AdMSCs (Пред транспортот и по транспортот)
Дијаметарот и агрегацијата беа одредени и од Countstar Rigel.Дијаметарот на AdMSC беше драстично променет по транспортот во споредба со претходниот транспорт.Дијаметарот пред транспортот беше 19µm, но се зголеми на 21µm по транспортот.Агрегацијата на пред транспортот беше 20%, но по транспортот се зголеми на 25%.Од сликите снимени од Countstar Rigel, фенотипот на AdMSC беше драстично променет по транспортот.Резултатите беа прикажани на Слика 4.
Слика 4: Дијаметарот и резултатите од агрегација.О: Репрезентативните слики на AdMSC, фенотипот на AdMSC беа драстично променети по транспортот.Б: Агрегацијата пред транспортот беше 20%, но се зголеми на 25% по транспортот.C: Дијаметарот пред транспортот беше 19µm, но се зголеми на 21µm по транспортот.
Одредете го имунофенотипот на AdMSC од страна на Countstar Rigel
Имунофенотипот на AdMSC беше одреден од Countstar Rigel, AdMSCs беа инкубирани со различни антитела соодветно (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Постапката за примена на бојата на сигналот беше создадена со поставување зелен канал за сликање на PE флуоресценција, плус светло поле.Референтната сегментација на сликата на светло поле беше применета како маска за примерок на PE флуоресцентниот сигнал.Резултатите од CD105 беа прикажани (слика 5).
Слика 5: ЦД105 резултатите од AdMSC беа утврдени од Countstar Rigel.О: Квантитативна анализа на позитивниот процент на CD105 во различни примероци со софтвер FCS express 5 plus.Б: Висококвалитетните слики обезбедуваат дополнителни морфолошки информации.В: Потврдени резултати по сликички на секоја поединечна клетка, софтверските алатки FCS ги поделиле клетките во различни групи според нивната различна протеинска експресија.
Резултатите од други антитела беа прикажани на Сл. 6
Слика 6: А: Репрезентативна слика на ASC со типична морфологија во облик на вретено.Снимено со микроскоп OLYMPUS.Оригинално зголемување, (10x).Б: Адипогената диференцијација на ASC е потврдена со боење со рутениум црвено што покажува области на минерализација.Снимено со микроскоп OLYMPUS.Оригинално зголемување (10x).C: Карактеризација на Countstar FL на ASCs.
Резиме:
Countstar FL може да ја следи концентрацијата, одржливоста и карактеристиките на фенотипот (и нивните промени) за време на производството и диференцијацијата на овие матични клетки.FCS Express ја обезбедува функцијата за прегледување на секоја сигнална ќелија, потврдување на податоците преку сликата.Корисникот исто така може да има доверба да ги спроведе следните експерименти врз основа на резултатите од Countstar Rigel.Countstar Rigel нуди брз, софистициран и сигурен метод за контрола на квалитетот на матичните клетки.
