ഒരു നോവൽ ഇമേജിംഗ് സൈറ്റോമെറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെം സെല്ലിന്റെ നേരിട്ടുള്ള ഏകാഗ്രത, പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഫിനോടൈപ്പ് അളക്കൽ

സംഗ്രഹം: മെസെൻചൈമൽ സ്റ്റെം സെല്ലുകൾ മെസോഡെർമിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ കഴിയുന്ന പ്ലൂറിപോട്ടന്റ് സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഒരു ഉപവിഭാഗമാണ്.അവരുടെ സ്വയം-പകർത്തൽ പുതുക്കലും മൾട്ടി-ഡയറക്ഷൻ ഡിഫറൻഷ്യേഷൻ സവിശേഷതകളും ഉള്ളതിനാൽ, വൈദ്യശാസ്ത്രത്തിലെ വിവിധ ചികിത്സാരീതികൾക്ക് അവർക്ക് ഉയർന്ന സാധ്യതയുണ്ട്.മെസെൻചൈമൽ സ്റ്റെം സെല്ലുകൾക്ക് സവിശേഷമായ രോഗപ്രതിരോധ പ്രതിഭാസവും രോഗപ്രതിരോധ നിയന്ത്രണ ശേഷിയുമുണ്ട്.അതിനാൽ, സ്റ്റെം സെൽ ട്രാൻസ്പ്ലാൻറേഷൻ, ടിഷ്യു എഞ്ചിനീയറിംഗ്, ഓർഗൻ ട്രാൻസ്പ്ലാൻറേഷൻ എന്നിവയിൽ മെസെൻചൈമൽ സ്റ്റെം സെല്ലുകൾ ഇതിനകം വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഈ ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്കപ്പുറം, അടിസ്ഥാനപരവും ക്ലിനിക്കൽ ഗവേഷണപരവുമായ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലെ സീഡർ സെല്ലുകളായി ടിഷ്യു എഞ്ചിനീയറിംഗിൽ അവ അനുയോജ്യമായ ഒരു ഉപകരണമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഇതുവരെ, മെസെൻചൈമൽ സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണത്തിന് വ്യാപകമായി അംഗീകരിക്കപ്പെട്ട ഒരു രീതിയും മാനദണ്ഡവും ഇല്ല.ഈ സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഉൽപാദനത്തിലും വേർതിരിവിലും ഏകാഗ്രത, പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഫിനോടൈപ്പ് സവിശേഷതകൾ (അവയുടെ മാറ്റങ്ങളും) നിരീക്ഷിക്കാൻ Countstar Rigel-ന് കഴിയും.സെൽ ഗുണനിലവാര നിരീക്ഷണത്തിന്റെ മുഴുവൻ പ്രക്രിയയിലും സ്ഥിരമായ ബ്രൈറ്റ്ഫീൽഡും ഫ്ലൂറസെൻസ് അധിഷ്ഠിത ഇമേജ് റെക്കോർഡിംഗുകളും നൽകുന്ന കൂടുതൽ രൂപാന്തര വിവരങ്ങൾ നേടുന്നതിലും Countstar Rigel-ന് പ്രയോജനമുണ്ട്.സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണത്തിനായി Countstar Rigel വേഗതയേറിയതും സങ്കീർണ്ണവും വിശ്വസനീയവുമായ ഒരു രീതി വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.

വസ്തുക്കളും രീതികളും:
AO/PI സ്റ്റെയിനിംഗ് സൊല്യൂഷൻ (Shanghai RuiYu, CF002) പ്രൊഫസർ നിയാൻമിൻ ക്വി സമ്മാനിച്ചതാണ് അഡിപ്പോസ് ഡിറൈവ്ഡ് മെസെൻചൈമൽ സ്റ്റെം സെല്ലുകൾ (AdMSCs).ആന്റിബോഡി: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD കമ്പനി).
37℃, 5% CO2 ഈർപ്പമുള്ള ഇൻകുബേറ്ററിലാണ് AdMSCകൾ സംസ്കരിച്ചത്.ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ട്രിപ്സിൻ ഉപയോഗിച്ച് ദഹിപ്പിക്കുക.
സിഡി മാർക്കർ സ്റ്റെയിനിംഗ് നടപടിക്രമം ആന്റിബോഡിയുടെ മാനുവൽ ആയി പിന്തുടർന്നു.
Countstar Rigel ഉപയോഗിച്ച് സിഡി മാർക്കർ കണ്ടെത്തൽ:
1. PE ചാനൽ ഇമേജ് PE ഫ്ലൂറസെൻസിലേക്ക് സജ്ജീകരിച്ചുകൊണ്ട് ഒരു സിഗ്നൽ-കളർ ആപ്ലിക്കേഷൻ നടപടിക്രമം സൃഷ്ടിച്ചു.
2. ഓരോ ചേമ്പറിൽ നിന്നും 3 ഫീൽഡുകൾ പിടിച്ചെടുത്തു.
3. ഇമേജിംഗും പ്രാരംഭ വിശകലനവും പൂർത്തിയായ ശേഷം, പോസിറ്റീവ്, നെഗറ്റീവ് ട്രാൻസ്ഫെക്ഷനിനായുള്ള ത്രെഷോൾഡ് (ലോഗ് ഗേറ്റ്) ക്രമീകരണം FCS സോഫ്റ്റ്വെയർ സജ്ജമാക്കി.

സ്റ്റെം സെല്ലിന്റെ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
ഇനിപ്പറയുന്ന ചിത്രം (ചിത്രം 1) നടപടിക്രമം കാണിക്കുന്നു സ്റ്റെം സെൽ തെറാപ്പി .

ചിത്രം 1: സ്റ്റെം സെൽ തെറാപ്പിയുടെ നടപടിക്രമം

ഫലം:
AdMSC-കളുടെ ഏകാഗ്രത, പ്രവർത്തനക്ഷമത, വ്യാസം, സമാഹരണം എന്നിവ നിർണ്ണയിക്കുന്നു.
AdMSC-കളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത നിർണ്ണയിക്കുന്നത് AO/PI ആണ്, ഗ്രീൻ ചാനലും റെഡ് ചാനലും ഇമേജ് AO, PI ഫ്ലൂറസെൻസിലേക്ക് സജ്ജീകരിച്ച് ഒരു ഇരട്ട-വർണ്ണ ആപ്ലിക്കേഷൻ നടപടിക്രമം സൃഷ്ടിച്ചു, കൂടാതെ ഒരു ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡും.ഉദാഹരണ ചിത്രങ്ങൾ ചിത്രം 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.

ചിത്രം 2. AdMSC-കളുടെ ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പും ശേഷവും ഉള്ള ചിത്രങ്ങൾ.എ. ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പ്;ഒരു പ്രതിനിധി ചിത്രം കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.B. ഗതാഗതത്തിനു ശേഷം;ഒരു പ്രതിനിധി ചിത്രം കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.

ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ളതിനെ അപേക്ഷിച്ച് ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം AdMSC-കളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത ഗണ്യമായി മാറി.ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ള പ്രവർത്തനക്ഷമത 92% ആയിരുന്നു, എന്നാൽ ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം അത് 71% ആയി കുറഞ്ഞു.ഫലം ചിത്രം 3 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.

ചിത്രം 3. AdMSC-കളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമതാ ഫലങ്ങൾ (ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പും ശേഷവും)

വ്യാസവും സമാഹരണവും കൌണ്ട്സ്റ്റാർ റിഗൽ നിർണ്ണയിച്ചു.ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ളതുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം AdMSC-കളുടെ വ്യാസം ഗണ്യമായി മാറി.ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ള വ്യാസം 19µm ആയിരുന്നു, എന്നാൽ ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം അത് 21µm ആയി വർദ്ധിച്ചു.ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ള സംഗ്രഹം 20% ആയിരുന്നു, എന്നാൽ ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം അത് 25% ആയി വർദ്ധിച്ചു.Countstar Rigel പകർത്തിയ ചിത്രങ്ങളിൽ നിന്ന്, ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം AdMSC-കളുടെ രൂപഭാവം ഗണ്യമായി മാറ്റി.ഫലങ്ങൾ ചിത്രം 4 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.

ചിത്രം 4: വ്യാസവും സമാഹരണ ഫലങ്ങളും.A: AdMSC-കളുടെ പ്രതിനിധി ചിത്രങ്ങൾ, AdMSC-കളുടെ ഫിനോടൈപ്പ് ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം ഗണ്യമായി മാറ്റി.ബി: ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ള സംയോജനം 20% ആയിരുന്നു, എന്നാൽ ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം അത് 25% ആയി വർദ്ധിച്ചു.സി: ഗതാഗതത്തിന് മുമ്പുള്ള വ്യാസം 19µm ആയിരുന്നു, എന്നാൽ ഗതാഗതത്തിന് ശേഷം അത് 21µm ആയി വർദ്ധിച്ചു.

Countstar Rigel മുഖേന AdMSC-കളുടെ ഇമ്മ്യൂണോഫെനോടൈപ്പ് നിർണ്ണയിക്കുക
AdMSC-കളുടെ ഇമ്മ്യൂണോഫെനോടൈപ്പ് നിർണ്ണയിച്ചത് Countstar Rigel ആണ്, AdMSC-കൾ യഥാക്രമം വ്യത്യസ്ത ആന്റിബോഡികൾ (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു.ഇമേജ് PE ഫ്ലൂറസെൻസിലേക്ക് ഒരു ഗ്രീൻ ചാനൽ സജ്ജീകരിച്ചുകൊണ്ട് ഒരു സിഗ്നൽ-കളർ ആപ്ലിക്കേഷൻ നടപടിക്രമം സൃഷ്ടിച്ചു, കൂടാതെ ഒരു ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡും.PE ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ സാമ്പിൾ ചെയ്യാൻ ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡ് പിക്ചർ റഫറൻസ് സെഗ്മെന്റേഷൻ ഒരു മാസ്കായി പ്രയോഗിച്ചു.CD105 ന്റെ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (ചിത്രം 5).

ചിത്രം 5: AdMSC-കളുടെ CD105 ഫലങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചത് Countstar Rigel ആണ്.എ: എഫ്‌സി‌എസ് എക്‌സ്‌പ്രസ് 5 പ്ലസ് സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ മുഖേന വിവിധ സാമ്പിളുകളിലെ സിഡി105-ന്റെ പോസിറ്റീവ് ശതമാനത്തിന്റെ അളവ് വിശകലനം.ബി: ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള ചിത്രങ്ങൾ കൂടുതൽ രൂപാന്തര വിവരങ്ങൾ നൽകുന്നു.സി: ഓരോ സെല്ലിന്റെയും ലഘുചിത്രങ്ങളാൽ സാധൂകരിച്ച ഫലങ്ങൾ, FCS സോഫ്റ്റ്‌വെയർ ടൂളുകൾ അവയുടെ വ്യത്യസ്തമായ പ്രോട്ടീൻ എക്സ്പ്രഷൻ അനുസരിച്ച് സെല്ലുകളെ വ്യത്യസ്ത ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.

മറ്റ് ആന്റിബോഡികളുടെ ഫലങ്ങൾ ചിത്രം 6 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു

ചിത്രം 6: A: സാധാരണ സ്പിൻഡിൽ ആകൃതിയിലുള്ള രൂപഘടനയുള്ള ASC-കളുടെ ഒരു പ്രതിനിധി ചിത്രം.ഒളിമ്പസ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് പകർത്തിയത്.യഥാർത്ഥ മാഗ്നിഫിക്കേഷൻ, (10x).ബി: ധാതുവൽക്കരണത്തിന്റെ മേഖലകൾ കാണിക്കുന്ന റുഥേനിയം റെഡ് സ്റ്റെയിനിംഗ് വഴി എഎസ്‌സികളുടെ അഡിപൊജെനിക് വ്യത്യാസം തെളിയിക്കുന്നു.ഒളിമ്പസ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് പകർത്തിയത്.യഥാർത്ഥ മാഗ്‌നിഫിക്കേഷൻ (10x).സി: ASC-കളുടെ Countstar FL സ്വഭാവരൂപീകരണം.

സംഗ്രഹം:
ഈ സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഉൽപാദനത്തിലും വ്യതിരിക്തതയിലും ഏകാഗ്രത, പ്രവർത്തനക്ഷമത, ഫിനോടൈപ്പ് സവിശേഷതകൾ (അവയുടെ മാറ്റങ്ങൾ) എന്നിവ Countstar FL-ന് നിരീക്ഷിക്കാനാകും.ഓരോ സിഗ്നൽ സെല്ലും അവലോകനം ചെയ്യുന്നതിനും ഇമേജിലൂടെ ഡാറ്റ സാധൂകരിക്കുന്നതിനുമുള്ള ഫംഗ്ഷൻ FCS എക്സ്പ്രസ് നൽകുന്നു.Countstar Rigel ഫലങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി അടുത്ത പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്താനുള്ള ആത്മവിശ്വാസവും ഉപയോക്താവിന് ഉണ്ടായിരിക്കും.സ്റ്റെം സെല്ലുകളുടെ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണത്തിനായി Countstar Rigel വേഗതയേറിയതും സങ്കീർണ്ണവും വിശ്വസനീയവുമായ ഒരു രീതി വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.