Хураангуй: Мезенхимийн үүдэл эсүүд нь мезодермээс тусгаарлагдах боломжтой плюрипотент үүдэл эсийн дэд хэсэг юм.Өөрийгөө хуулбарлах шинэчлэгдэх, олон чиглэлтэй ялгах шинж чанараараа тэд анагаах ухаанд янз бүрийн эмчилгээний өндөр чадавхийг эзэмшдэг.Мезенхимийн үүдэл эсүүд нь өвөрмөц дархлааны фенотип, дархлаа зохицуулах чадвартай байдаг.Тиймээс мезенхимийн үүдэл эсийг үүдэл эс шилжүүлэн суулгах, эдийн инженерчлэл, эрхтэн шилжүүлэн суулгах зэрэгт аль хэдийн өргөн ашиглаж байна.Эдгээр хэрэглээнээс гадна тэдгээрийг эдийн инженерчлэлийн хамгийн тохиромжтой хэрэгсэл болгон үндсэн болон эмнэлзүйн судалгааны цуврал туршилтуудад үр суулгагч эс болгон ашигладаг.Өнөөг хүртэл мезенхимийн үүдэл эсийн чанарын хяналтын нийтлэг хүлээн зөвшөөрөгдсөн арга, стандарт байдаггүй.Countstar Rigel нь эдгээр үүдэл эсийг үйлдвэрлэх, ялгах явцад концентраци, амьдрах чадвар, фенотипийн шинж чанарыг (мөн тэдгээрийн өөрчлөлтийг) хянах боломжтой.Countstar Rigel нь эсийн чанарыг хянах бүх үйл явцын туршид байнгын гэрэлтүүлгийн талбар болон флюресцентэд суурилсан зургийн бичлэгээр хангадаг нэмэлт морфологийн мэдээллийг олж авах давуу талтай.Countstar Rigel нь үүдэл эсийн чанарыг хянах хурдан, боловсронгуй, найдвартай аргыг санал болгодог.
Материал ба арга:
Өөхний гаралтай мезенхимийн үүдэл эсийг (AdMSCs) профессор Nianmin Qi, AO/PI будгийн уусмалаар бэлэглэсэн (Shanghai RuiYu, CF002).Эсрэгбие: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD компани).
AdMSC-ийг 37℃, 5% CO2 чийгшүүлсэн инкубаторт өсгөвөрлөсөн.Хэрэглэхийн өмнө трипсинээр шингээнэ.
Эсрэгбиеийн гарын авлагын дагуу CD маркераар будах процедурыг дагаж мөрдсөн.
Countstar Rigel ашиглан CD тэмдэглэгээг илрүүлэх:
1. PE сувгийг дүрсний PE флюресценц болгон тохируулах замаар дохионы өнгө хэрэглэх процедурыг үүсгэсэн.
2. Тасалгаа бүрээс 3 талбайг авсан.
3. Дүрслэл болон анхны шинжилгээг хийж дууссаны дараа эерэг ба сөрөг дамжуулалтын босго (логийн хаалга) тохиргоог FCS программ хангамжаар тогтоов.
Үүдэл эсийн чанарын хяналт
Дараах зураг (Зураг 1) -ийн үйлдлийг харуулав үүдэл эсийн эмчилгээ .
Зураг 1: Үүдэл эсийн эмчилгээний журам
Үр дүн:
AdMSC-ийн концентраци, амьдрах чадвар, диаметр, нэгтгэлийг тодорхойлох.
AdMSC-ийн амьдрах чадварыг AO/PI-ээр тодорхойлж, Ногоон суваг, Улаан сувгийг дүрсний AO болон PI флюресценц, мөн тод талбар болгон тохируулснаар давхар өнгөт хэрэглээний процедурыг үүсгэсэн.Жишээ зургуудыг Зураг 2-т үзүүлэв.
Зураг 2. AdMSC-ийг тээвэрлэхээс өмнө болон тээвэрлэсний дараах зураг.A. Тээвэрлэлтийн өмнө;төлөөлөх дүрсийг үзүүлэв.B. Тээвэрлэлтийн дараа;төлөөлөх дүрсийг үзүүлэв.
AdMSC-ийн амьдрах чадвар нь тээвэрлэлтийн өмнөхтэй харьцуулахад тээвэрлэлтийн дараа эрс өөрчлөгдсөн.Тээвэрлэхээс өмнө амьдрах чадвар 92% байсан бол тээвэрлэсний дараа 71% болж буурсан.Үр дүнг Зураг 3-т үзүүлэв.
Зураг 3. AdMSC-ийн амьдрах чадварын үр дүн (Тээвэрлэхээс өмнө болон тээвэрлэсний дараа)
Диаметр ба нэгтгэлийг мөн Countstar Rigel тодорхойлсон.AdMSC-ийн диаметрийг тээвэрлэхээс өмнөхтэй харьцуулахад тээвэрлэсний дараа эрс өөрчлөгдсөн.Тээвэрлэхээс өмнө диаметр нь 19 μм байсан бол тээвэрлэсний дараа 21 μм болж нэмэгдсэн.Тээвэрлэхээс өмнөх нийлбэр 20% байсан бол тээвэрлэсний дараа 25% болж өссөн.Countstar Rigel-ийн авсан зургуудаас харахад AdMSC-ийн фенотип тээвэрлэлтийн дараа эрс өөрчлөгдсөн байна.Үр дүнг Зураг 4-т үзүүлэв.
Зураг 4: Диаметр ба нэгтгэлийн үр дүн.Х: AdMSC-ийн төлөөлөл болсон зургууд, AdMSC-ийн фенотип нь тээвэрлэлтийн дараа эрс өөрчлөгдсөн.Б: Тээвэрлэхээс өмнөх агрегат 20% байсан бол тээвэрлэсний дараа 25% болж өссөн.C: Тээвэрлэхээс өмнө диаметр нь 19 μm байсан бол тээвэрлэсний дараа 21 μм болж нэмэгдсэн.
Countstar Rigel-ийн AdMSCs-ийн иммунофенотипийг тодорхойлно
AdMSC-ийн иммунофенотипийг Countstar Rigel тодорхойлсон бөгөөд AdMSCs-ийг өөр өөр эсрэгбиемүүдээр (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) өсгөвөрлөсөн.Зургийн PE флюресценц, дээр нь тод талбарт Ногоон сувгийг тохируулах замаар дохионы өнгө хэрэглэх процедурыг үүсгэсэн.Гэрэлт талбайн зургийн лавлагаа сегментчиллийг PE флюресценцийн дохиог дээж авахын тулд маск болгон ашигласан.CD105-ийн үр дүнг үзүүлэв (Зураг 5).
Зураг 5: AdMSC-ийн CD105 үр дүнг Countstar Rigel тодорхойлсон.Х: Янз бүрийн дээж дэх CD105-ийн эерэг хувийг FCS express 5 plus программ хангамжийн тоон шинжилгээ.Б: Өндөр чанартай зураг нь морфологийн нэмэлт мэдээллийг өгдөг.C: Үр дүнг нүд бүрийн өнгөц зургаар баталгаажуулсан FCS программ хангамжийн хэрэгслүүд нь эсүүдийг уургийн илэрхийлэлийн дагуу өөр өөр бүлэгт хуваасан.
Бусад эсрэгбиеийн үр дүнг Зураг 6-д үзүүлэв
Зураг 6: A: Спиндлийн хэлбэрийн ердийн морфологи бүхий ASC-ийн төлөөлөл.OLYMPUS микроскопоор авсан.Жинхэнэ томруулалт, (10x).B: ASC-ийн адипоген ялгарал нь эрдэсжилтийн талбайг харуулсан рутений улаан будгаар нотлогддог.OLYMPUS микроскопоор авсан.Жинхэнэ томруулалт (10x).C: ASC-ийн Countstar FL шинж чанар.
Дүгнэлт:
Countstar FL нь эдгээр үүдэл эсийг үйлдвэрлэх, ялгах явцад концентраци, амьдрах чадвар, фенотипийн шинж чанарыг (мөн тэдгээрийн өөрчлөлтийг) хянах боломжтой.FCS express нь дохионы нүд бүрийг шалгаж, зургаар дамжуулан өгөгдлийг баталгаажуулах функцийг хангадаг.Хэрэглэгч мөн Countstar Rigel-ийн үр дүнд үндэслэн дараагийн туршилтуудыг хийх итгэлтэй байж болно.Countstar Rigel нь үүдэл эсийн чанарыг хянах хурдан, боловсронгуй, найдвартай аргыг санал болгодог.
