Цусан дахь лейкоцитын шинжилгээ нь эмнэлзүйн лабораторид эсвэл цусны банкинд хийдэг ердийн шинжилгээ юм.Лейкоцитүүдийн концентраци, амьдрах чадвар нь цусны хадгалалтын чанарыг хянах чухал үзүүлэлт юм.Лейкоцитээс гадна бүхэл цус нь олон тооны ялтас, цусны улаан эс эсвэл эсийн хог хаягдлыг агуулдаг тул бүх цусыг микроскопоор эсвэл тод талбайн эсийн тоолуураар шууд шинжлэх боломжгүй болгодог.Цусны цагаан эсийг тоолох уламжлалт аргууд нь улаан эсийн задралын процессыг агуулдаг бөгөөд энэ нь цаг хугацаа их шаарддаг.
AOPI Хос флюресцент тоолох нь эсийн концентраци болон амьдрах чадварыг илрүүлэхэд ашигладаг шинжилгээний төрөл юм.Уг уусмал нь акридин жүрж (ногоон флюресцент нуклейн хүчлийн толбо) ба пропидиум иодид (улаан флюресцент нуклейн хүчлийн толбо) -ийн хослол юм.Propidium iodide (PI) нь зөвхөн мембраны гэмтэлтэй эсүүдэд нэвтэрдэг, харин акридин жүрж нь популяцийн бүх эсийг нэвтлэх чадвартай байдаг.Цөмд будагч бодис хоёулаа байх үед пропидиум иодид нь флюресценцийн резонансын энергийн дамжуулалтаар (FRET) акридины улбар шар өнгийн флюресценцийг бууруулдаг.Үүний үр дүнд бүрэн бүтэн мембрантай цөмтэй эсүүд нь флюресцент ногоон өнгөөр будаж, амьд гэж тооцогддог бол мембран нь гэмтсэн цөмт эсүүд зөвхөн флюресцент улаанаар будаж, Countstar® Rigel системийг ашиглах үед үхсэнд тооцогддог.
Countstar Rigel нь бүхэл цусан дахь цагаан эсийг хурдан шинжлэх боломжийг олгодог олон төрлийн эсийн популяцийн шинж чанарыг тодорхойлох хамгийн тохиромжтой шийдэл юм.
Туршилтын журам:
1. 20 мкл цусны дээж авч дээжийг 180 мкл PBS-д шингэлнэ.
2. 12μl AO/PI уусмалыг 12μl дээжинд нэмж, пипеткээр зөөлөн холино;
3. Тасалгааны слайд руу 20 мкл хольцыг зурах;
4. Эсийг камерт 1 минут орчим байлгана;
5. Countstar FL багаж руу слайдыг шавьж;
6. “AO/PI Viability” шинжилгээг сонгоод, дараа нь энэ дээжийн дээжийн ID-г оруулна уу.
7. Шингэрэлтийн харьцаа, Cell Type-ийг сонгоод "Run" дээр дарж туршилтыг эхлүүлнэ.
Анхааруулга: AO болон PI нь хорт хавдар үүсгэгч бодис юм.Оператор арьс, нүдтэй шууд харьцахаас зайлсхийхийн тулд хувийн хамгаалалтын хэрэгсэл (PPE) өмсөхийг зөвлөж байна.
Үр дүн:
1. Бүтэн цусны тод талбайн зураг
Бүхэл бүтэн цусны тод талбайн зураг дээр WBC нь цусны улаан эсийн дунд харагдахгүй байна.(Зураг 1)
Зураг 1 Цусны тод талбайн зураг.
2. Цусны флюресценцийн зураг
AO болон PI будаг нь эсийн эсийн цөм дэх ДНХ-г толбо үүсгэдэг.Тиймээс ялтас, цусны улаан эс эсвэл эсийн хог хаягдал нь лейкоцитын концентраци болон амьдрах чадварт нөлөөлөх чадваргүй байдаг.Амьд лейкоцитууд (Ногоон) ба үхсэн лейкоцитууд (Улаан) нь флюресценцийн зураг дээр амархан харагддаг.(Зураг 2)
Зураг 2 Бүх цусны флюресценцийн зураг.(A).AO сувгийн зураг;(B) PI сувгийн зураг;(C) AO болон PI сувгийн зургийг нэгтгэх.
3. Лейкоцитүүдийн концентраци ба амьдрах чадвар
Countstar FL программ хангамж нь гурван камерын эсийг автоматаар тоолж, WBC эсийн нийт тоо (1202), концентраци (1.83 x 106 эс/мл), амьдрах чадварын (82.04%) дундаж утгыг тооцдог.Цусны зураг, өгөгдлийг нэмэлт дүн шинжилгээ хийх, архивлах зорилгоор PDF, зураг эсвэл Excel хэлбэрээр хялбархан экспортлох боломжтой.
Зураг 3 Countstar Rigel програмын дэлгэцийн агшин
