कर्करोग पेशी संशोधनात काउंटस्टारचे अनुप्रयोग

काउंटस्टार प्रणाली इमेज सायटोमीटर आणि सेल काउंटरला सिंगल बेंच-टॉप इन्स्ट्रुमेंटमध्ये एकत्र करते.ही ऍप्लिकेशन-चालित, कॉम्पॅक्ट आणि ऑटोमेटेड सेल इमेजिंग सिस्टीम कर्करोगाच्या पेशींच्या संशोधनासाठी सर्व-इन-वन सोल्यूशन प्रदान करते, ज्यामध्ये सेल मोजणी, व्यवहार्यता (AO/PI, ट्रायपॅन ब्लू), अपोप्टोसिस (Annexin V-FITC/PI), सेल यांचा समावेश आहे. सायकल (PI), आणि GFP/RFP ट्रान्सफेक्शन.

गोषवारा

कर्करोग हे जगभरातील मृत्यूच्या मुख्य कारणांपैकी एक आहे आणि कर्करोगाच्या उपचारांच्या नवीन पद्धतींचा विकास खूप महत्त्वाचा आहे.कॅन्सर सेल ही कॅन्सरची मूलभूत संशोधन वस्तू आहे, कॅन्सर सेलमधून विविध माहितीचे मूल्यमापन करणे आवश्यक आहे.या संशोधन क्षेत्रासाठी जलद, विश्वासार्ह, साधे आणि तपशीलवार पेशी विश्लेषण आवश्यक आहे.काउंटस्टार प्रणाली कर्करोगाच्या पेशींच्या विश्लेषणासाठी एक सोपा उपाय प्लॅटफॉर्म प्रदान करते.

काउंटस्टार रिगेल द्वारे कर्करोग सेल अपोप्टोसिसचा अभ्यास करा

अनेक प्रयोगशाळांमध्ये सेल कल्चरच्या आरोग्याचे मूल्यांकन करण्यापासून ते यौगिकांच्या पॅनेलच्या विषारीपणाचे मूल्यांकन करण्यासाठी ऍपोप्टोसिस ऍसेस नियमितपणे वापरल्या जातात.
ऍपोप्टोसिस परख हा ऍनेक्सिन व्ही-एफआयटीसी/पीआय स्टेनिंग पद्धतीद्वारे पेशींच्या ऍपोप्टोसिस टक्केवारीचे निर्धारण करण्यासाठी वापरला जाणारा प्रकार आहे.एनेक्सिन व्ही फॉस्फेटिडाईलसरिन (PS) ला लवकर ऍपोप्टोसिस सेल किंवा नेक्रोसिस सेलसह बांधते.PI फक्त नेक्रोटिक/अत्यंत उशीरा अवस्थेत असलेल्या अपोप्टोटिक पेशींमध्ये प्रवेश करते.(चित्र 1)

A: अर्ली अपोप्टोसिस एनेक्सिन V (+), PI (-)

B: उशीरा अपोप्टोसिस अॅनेक्सिन V (+), PI (+)

आकृती1: Annexin V FITC आणि PI सह उपचार केलेल्या 293 पेशींच्या काउंटस्टार रीगेल चित्रांचे (5 x मोठेीकरण) विस्तारित तपशील

कर्करोगाच्या पेशींचे सेल सायकल विश्लेषण

सेल सायकल किंवा सेल-विभाजन चक्र ही पेशीमध्ये घडणाऱ्या घटनांची मालिका आहे ज्यामुळे त्याचे विभाजन होते आणि दोन कन्या पेशी तयार करण्यासाठी त्याच्या DNA (DNA प्रतिकृती) ची नक्कल होते.न्यूक्लियस असलेल्या पेशींमध्ये, युकेरियोट्सप्रमाणे, सेल सायकल देखील तीन कालखंडांमध्ये विभागली जाते: इंटरफेस, मिटोटिक (एम) फेज आणि साइटोकिनेसिस.प्रोपिडियम आयोडाइड (पीआय) हा न्यूक्लियर स्टेनिंग डाई आहे जो सेल सायकल मोजण्यासाठी वारंवार वापरला जातो.डाई जिवंत पेशींमध्ये प्रवेश करू शकत नसल्यामुळे, डाग येण्यापूर्वी पेशी इथेनॉलने निश्चित केल्या जातात.नंतर सर्व पेशी डागल्या जातात.विभाजनाची तयारी करणार्‍या पेशींमध्ये डीएनएची वाढती मात्रा असते आणि प्रमाणानुसार वाढलेली प्रतिदीप्ति दिसून येते.सेल सायकलच्या प्रत्येक टप्प्यातील पेशींची टक्केवारी निश्चित करण्यासाठी फ्लोरोसेन्स तीव्रतेतील फरक वापरला जातो.Countstar प्रतिमा कॅप्चर करू शकते आणि परिणाम FCS एक्सप्रेस सॉफ्टवेअरमध्ये प्रदर्शित केले जातील.(आकृती 2)

आकृती 2: MCF-7 (A) आणि 293T (B) PI सह सेल सायकल डिटेक्शन किटने डागलेले होते, परिणाम काउंटस्टार रीगेलने निर्धारित केले होते आणि FCS एक्सप्रेसद्वारे विश्लेषण केले होते.

सेलमधील व्यवहार्यता आणि GFP संक्रमण निर्धारण

बायोप्रोसेस दरम्यान, GFP चा वापर अनेकदा रीकॉम्बीनंट प्रोटीनसह सूचक म्हणून केला जातो.GFP फ्लोरोसेंट लक्ष्य प्रोटीन अभिव्यक्ती प्रतिबिंबित करू शकते हे निश्चित करा.काउंटस्टार रिगेल GFP ट्रान्सफेक्शन तसेच व्यवहार्यता तपासण्यासाठी एक जलद आणि सोपी परख देते.मृत पेशींची संख्या आणि एकूण पेशींची संख्या निश्चित करण्यासाठी पेशींना प्रोपिडियम आयोडाइड (PI) आणि Hoechst 33342 ने डाग दिले होते.Countstar Rigel एकाच वेळी GFP अभिव्यक्ती कार्यक्षमता आणि व्यवहार्यतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी एक द्रुत, परिमाणात्मक पद्धत ऑफर करते.(चित्र 4)

आकृती 4: Hoechst 33342 (निळा) वापरून पेशी स्थित आहेत आणि GFP व्यक्त करणार्‍या पेशींची टक्केवारी (हिरव्या) सहजपणे निर्धारित केली जाऊ शकते.नॉनव्हेबल सेल प्रोपिडियम आयोडाइड (PI; लाल) सह डागलेले असतात.

व्यवहार्यता आणि सेल संख्या

AO/PI ड्युअल-फ्लोरेसेस मोजणी हा सेल एकाग्रता, व्यवहार्यता शोधण्यासाठी वापरला जाणारा परख प्रकार आहे.हे वेगवेगळ्या सेल प्रकारानुसार सेल लाइन मोजणी आणि प्राथमिक सेल मोजणीमध्ये विभागले गेले.द्रावणामध्ये ग्रीन-फ्लोरोसंट न्यूक्लिक अॅसिड डाग, अॅक्रिडाइन ऑरेंज आणि रेडफ्लुरोसंट न्यूक्लिक अॅसिड डाग, प्रोपिडियम आयोडाइड यांचे मिश्रण असते.प्रोपिडियम आयोडाइड हा एक मेम्ब्रेन एक्सक्लूजन डाई आहे जो केवळ तडजोड केलेल्या पडद्याच्या पेशींमध्ये प्रवेश करतो तर ऍक्रिडाइन ऑरेंज लोकसंख्येतील सर्व पेशींमध्ये प्रवेश करतो.जेव्हा दोन्ही रंग न्यूक्लियसमध्ये उपस्थित असतात, तेव्हा प्रोपिडियम आयोडाइड फ्लूरोसेन्स रेझोनान्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारे ऍक्रिडाइन ऑरेंज फ्लोरोसेन्समध्ये घट घडवून आणते.परिणामी, अखंड झिल्ली असलेल्या न्यूक्लिएटेड पेशी फ्लोरोसेंट हिरव्या रंगाच्या असतात आणि त्यांना जिवंत म्हणून गणले जाते, तर तडजोड केलेल्या झिल्ली असलेल्या न्यूक्लिएटेड पेशी केवळ फ्लोरोसेंट लाल डाग करतात आणि काउंटस्टार रीगेल प्रणाली वापरताना मृत म्हणून गणले जातात.लाल रक्तपेशी, प्लेटलेट्स आणि मोडतोड यांसारखी केंद्रक नसलेली सामग्री फ्लूरोसेस होत नाही आणि काउंटस्टार रिगेल सॉफ्टवेअरद्वारे दुर्लक्ष केले जाते.(चित्र 5)

आकृती 5: काउंटस्टारने PBMC एकाग्रता आणि व्यवहार्यतेच्या सोप्या, अचूक निर्धारासाठी ड्युअल-फ्लोरेसेन्स स्टेनिंग पद्धत ऑप्टिमाइझ केली आहे.AO/PI सह डागलेल्या नमुन्यांचे काउंस्टार रिगेलसह विश्लेषण केले जाऊ शकते