संपूर्ण रक्तातील ल्युकोसाइट्सचे विश्लेषण करणे ही क्लिनिकल लॅब किंवा रक्तपेढीमध्ये नियमित तपासणी आहे.रक्त साठवणुकीच्या गुणवत्तेचे नियंत्रण म्हणून ल्युकोसाइट्सची एकाग्रता आणि व्यवहार्यता ही महत्त्वाची निर्देशांक आहे.ल्युकोसाइट व्यतिरिक्त, संपूर्ण रक्तामध्ये मोठ्या प्रमाणात प्लेटलेट्स, लाल रक्तपेशी किंवा सेल्युलर मोडतोड असतात, ज्यामुळे संपूर्ण रक्ताचे थेट सूक्ष्मदर्शकाखाली किंवा उजळ फील्ड सेल काउंटरचे विश्लेषण करणे अशक्य होते.पांढऱ्या रक्त पेशी मोजण्याच्या पारंपारिक पद्धतींमध्ये RBC lysis प्रक्रिया समाविष्ट असते, जी वेळखाऊ असते.
AOPI ड्युअल-फ्लोरेसेस मोजणी हा सेल एकाग्रता आणि व्यवहार्यता शोधण्यासाठी वापरला जाणारा परख प्रकार आहे.अॅक्रिडाइन ऑरेंज (हिरवा-फ्लोरोसंट न्यूक्लिक अॅसिड डाग) आणि प्रोपिडियम आयोडाइड (लाल-फ्लोरोसंट न्यूक्लिक अॅसिड डाग) यांचे मिश्रण आहे.प्रोपिडियम आयोडाइड (पीआय) हा एक झिल्ली अपवर्जन रंग आहे जो केवळ तडजोड केलेल्या पडद्याच्या पेशींमध्ये प्रवेश करतो, तर ऍक्रिडाइन ऑरेंज लोकसंख्येतील सर्व पेशींमध्ये प्रवेश करण्यास सक्षम आहे.जेव्हा दोन्ही रंग न्यूक्लियसमध्ये उपस्थित असतात, तेव्हा प्रोपिडियम आयोडाइड फ्लूरोसेन्स रेझोनान्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारे ऍक्रिडाइन ऑरेंज फ्लोरोसेन्समध्ये घट घडवून आणते.परिणामी, अखंड झिल्ली असलेल्या न्यूक्लिएटेड पेशी फ्लोरोसेंट हिरवा डाग करतात आणि जिवंत म्हणून गणल्या जातात, तर तडजोड केलेल्या झिल्ली असलेल्या न्यूक्लिएटेड पेशी केवळ फ्लोरोसेंट लाल डाग करतात आणि Countstar® Rigel प्रणाली वापरताना मृत म्हणून गणले जातात.
काउंटस्टार रीगेल हे अनेक जटिल पेशींच्या लोकसंख्येच्या वैशिष्ट्यपूर्ण विश्लेषणासाठी एक आदर्श उपाय आहे, जे संपूर्ण रक्तातील पांढऱ्या-रक्त-पेशींचे वेगाने विश्लेषण करण्यास सक्षम करते.
प्रायोगिक पद्धत:
1. 20 μl रक्ताचा नमुना घ्या आणि नमुना PBS च्या 180 μl मध्ये पातळ करा.
2. 12µl नमुन्यात 12µl AO/PI द्रावण जोडा, हलक्या हाताने पिपेटमध्ये मिसळा;
3. चेंबर स्लाइडमध्ये 20µl मिश्रण काढा;
4. पेशींना सुमारे 1 मिनिटासाठी चेंबरमध्ये स्थिर होऊ द्या;
5. काउंटस्टार FL इन्स्ट्रुमेंटमध्ये स्लाइडची कीटक करा;
6. "AO/PI व्यवहार्यता" परख निवडा, त्यानंतर या नमुन्यासाठी नमुना आयडी प्रविष्ट करा.
7. डायल्युशन रेशो, सेल प्रकार निवडा, चाचणी सुरू करण्यासाठी 'रन' क्लिक करा.
खबरदारी: AO आणि PI हे संभाव्य कार्सिनोजेन आहे.त्वचा आणि डोळ्यांचा थेट संपर्क टाळण्यासाठी ऑपरेटरने वैयक्तिक संरक्षणात्मक उपकरणे (PPE) घालण्याची शिफारस केली जाते.
परिणाम:
1. संपूर्ण रक्ताची उज्ज्वल फील्ड प्रतिमा
संपूर्ण रक्ताच्या तेजस्वी फील्ड प्रतिमेमध्ये, लाल रक्तपेशीमध्ये WBC दिसत नाहीत.(चित्र 1)
आकृती 1 संपूर्ण रक्ताची उजळ फील्ड प्रतिमा.
2. संपूर्ण रक्ताची फ्लोरोसेन्स प्रतिमा
AO आणि PI डाई हे दोन्ही पेशींच्या सेल न्यूक्लियसमधील डाग DNA आहेत.म्हणून, प्लेटलेट्स, लाल रक्तपेशी किंवा सेल्युलर मोडतोड ल्युकोसाइट्स एकाग्रता आणि व्यवहार्यता परिणामांवर परिणाम करू शकत नाहीत.जिवंत ल्युकोसाइट्स (हिरवे) आणि मृत ल्युकोसाइट्स (लाल) फ्लूरोसेन्स प्रतिमांमध्ये सहजपणे दृश्यमान आहेत.(आकृती 2)
आकृती 2 संपूर्ण रक्ताच्या फ्लोरोसेन्स प्रतिमा.(अ).एओ चॅनेलची प्रतिमा;(बी) पीआय चॅनेलची प्रतिमा;(C) AO आणि PI चॅनेलच्या प्रतिमा एकत्र करा.
3. ल्यूकोसाइट्सची एकाग्रता आणि व्यवहार्यता
Countstar FL सॉफ्टवेअर आपोआप तीन चेंबर विभागातील पेशींची गणना करते आणि एकूण WBC सेल संख्या (1202), एकाग्रता (1.83 x 106 पेशी/ml) आणि % व्यवहार्यता (82.04%) च्या सरासरी मूल्याची गणना करते.अतिरिक्त विश्लेषण किंवा डेटा संग्रहणासाठी संपूर्ण रक्त प्रतिमा आणि डेटा PDF, प्रतिमा किंवा Excel म्हणून सहजपणे निर्यात केला जाऊ शकतो.
काउंटस्टार रिगेल सॉफ्टवेअरचा आकृती 3 स्क्रीनशॉट
