Sistem Countstar menggabungkan sitometer imej dan pembilang sel ke dalam instrumen atas bangku tunggal.Sistem pengimejan sel dipacu aplikasi, padat dan automatik ini menyediakan penyelesaian semua-dalam-satu untuk penyelidikan sel kanser, termasuk pengiraan sel, daya maju (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), sel kitaran (PI), dan pemindahan GFP/RFP.
Abstrak
Kanser adalah salah satu punca utama kematian di seluruh dunia, dan pembangunan kaedah rawatan kanser baharu adalah sangat penting.Sel kanser adalah objek kajian asas kanser, pelbagai maklumat perlu dinilai daripada sel kanser.Kawasan penyelidikan ini memerlukan analisis sel yang cepat, boleh dipercayai, ringkas dan terperinci.Sistem Countstar menyediakan platform penyelesaian mudah untuk analisis sel kanser.
Kaji Apoptosis Sel Kanser oleh Countstar Rigel
Ujian apoptosis digunakan secara rutin di banyak makmal untuk pelbagai tujuan daripada menilai kesihatan kultur sel kepada menilai ketoksikan panel sebatian.
Ujian apoptosis ialah jenis yang digunakan untuk menentukan peratusan apoptosis sel dengan kaedah pewarnaan Annexin V-FITC/PI.Annexin V mengikat fosfatidilserin (PS) dengan sel apoptosis awal atau sel nekrosis.PI hanya memasuki sel apoptosis peringkat nekrotik/sangat lewat.(Rajah 1)
A： Apoptosis awal Annexin V (+), PI (-)
B：Apoptosis lewat Annexin V (+), PI (+)
Rajah1: Butiran diperbesarkan gambar Countstar Rigel (5 x pembesaran) 293 sel, dirawat dengan Annexin V FITC dan PI
Analisis Kitaran Sel Sel Kanser
Kitaran sel atau kitaran pembahagian sel ialah siri peristiwa yang berlaku dalam sel yang membawa kepada pembahagian dan pertindihan DNAnya (replikasi DNA) untuk menghasilkan dua sel anak.Dalam sel dengan nukleus, seperti dalam eukariota, kitaran sel juga dibahagikan kepada tiga tempoh: interfasa, fasa mitosis (M), dan sitokinesis.Propidium iodide (PI) ialah pewarna pewarna nuklear yang kerap digunakan untuk mengukur kitaran sel.Oleh kerana pewarna tidak boleh memasuki sel hidup, sel-sel difiksasi dengan etanol sebelum pewarnaan.Semua sel kemudian diwarnakan.Sel yang bersedia untuk pembahagian akan mengandungi peningkatan jumlah DNA dan memaparkan pendarfluor yang meningkat secara berkadar.Perbezaan dalam keamatan pendarfluor digunakan untuk menentukan peratusan sel dalam setiap fasa kitaran sel.Countstar boleh menangkap imej dan keputusan akan dipaparkan dalam perisian ekspres FCS.(Rajah 2)
Rajah 2: MCF-7 (A) dan 293T (B) telah diwarnai dengan Kit Pengesanan kitaran sel dengan PI, hasilnya ditentukan oleh Countstar Rigel, dan dianalisis oleh FCS express.
Daya maju dan Penentuan Transfeksi GFP dalam Sel
Semasa bioproses, GFP sering digunakan untuk bergabung dengan protein rekombinan sebagai penunjuk.Tentukan pendarfluor GFP boleh mencerminkan ekspresi protein sasaran.Countstar Rigel menawarkan ujian pantas dan mudah untuk menguji pemindahan GFP serta daya maju.Sel telah diwarnai dengan Propidium iodide (PI) dan Hoechst 33342 untuk menentukan populasi sel mati dan jumlah populasi sel.Countstar Rigel menawarkan kaedah kuantitatif yang pantas untuk menilai kecekapan dan daya maju ekspresi GFP pada masa yang sama.(Rajah 4)
Rajah 4: Sel terletak menggunakan Hoechst 33342 (biru) dan peratusan sel ekspresi GFP (hijau) boleh ditentukan dengan mudah.Sel yang tidak boleh hidup diwarnai dengan propidium iodide (PI; merah).
Daya maju dan Kiraan Sel
Pengiraan Dwi-pendarfluor AO/PI ialah jenis ujian yang digunakan untuk mengesan kepekatan sel, daya maju.Ia dibahagikan kepada pengiraan garisan sel dan pengiraan sel primer mengikut jenis sel yang berbeza.Penyelesaiannya mengandungi gabungan pewarnaan asid nukleik pendarfluor hijau, oren acridine, dan pewarnaan asid nukleik pendarfluor merah, propidium iodide.Propidium iodide ialah pewarna pengecualian membran yang hanya memasuki sel dengan membran terjejas manakala oren acridine menembusi semua sel dalam populasi.Apabila kedua-dua pewarna terdapat dalam nukleus, propidium iodide menyebabkan pengurangan dalam pendarfluor oren acridine oleh pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET).Akibatnya, sel bernukleus dengan membran utuh mengotorkan hijau pendarfluor dan dikira sebagai hidup, manakala sel bernukleus dengan membran terjejas hanya mengotorkan merah pendarfluor dan dikira sebagai mati apabila menggunakan sistem Countstar Rigel.Bahan bukan nukleus seperti sel darah merah, platelet dan serpihan tidak berpendar dan diabaikan oleh perisian Countstar Rigel.(Rajah 5)
Rajah 5: Countstar telah mengoptimumkan kaedah pewarnaan dwi-pendarfluor untuk penentuan kepekatan dan daya maju PBMC yang mudah dan tepat.Sampel yang diwarnai dengan AO/PI boleh dianalisis dengan Counstar Rigel
