Abstrak: Sel stem mesenchymal ialah subset sel stem pluripoten yang boleh diasingkan daripada mesoderm.Dengan ciri pembaharuan replikasi diri dan pembezaan pelbagai arah, mereka mempunyai potensi tinggi untuk pelbagai terapi dalam perubatan.Sel stem mesenchymal mempunyai fenotip imun yang unik dan keupayaan pengawalan imun.Oleh itu, sel stem mesenchymal telah digunakan secara meluas dalam pemindahan sel stem, kejuruteraan tisu, dan pemindahan organ.Dan Selain daripada aplikasi ini, ia digunakan sebagai alat yang ideal dalam kejuruteraan tisu sebagai sel pembenih dalam satu siri eksperimen penyelidikan asas dan klinikal.Sehingga kini, tiada kaedah dan piawaian yang diterima secara meluas untuk kawalan kualiti sel stem mesenchymal.Countstar Rigel boleh memantau kepekatan, daya maju, dan ciri fenotip (dan perubahannya) semasa pengeluaran dan pembezaan sel stem ini.Countstar Rigel juga mempunyai kelebihan dalam mendapatkan maklumat morfologi tambahan, yang disediakan oleh medan terang kekal dan rakaman imej berasaskan pendarfluor semasa keseluruhan proses pemantauan kualiti sel.Countstar Rigel menawarkan kaedah yang pantas, canggih dan boleh dipercayai untuk kawalan kualiti sel stem.
Bahan dan kaedah:
Sel stem mesenchymal yang berasal dari adiposa (AdMSCs) telah dihadiahkan oleh Profesor Nianmin Qi, larutan pewarna AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antibodi: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (Syarikat BD).
AdMSC dibiakkan dalam inkubator lembap 37℃, 5% CO2.Hadam dengan tripsin sebelum digunakan.
Prosedur pewarnaan penanda CD diikuti sebagai manual antibodi.
Pengesanan penanda CD dengan Countstar Rigel:
1. Prosedur permohonan warna isyarat telah dibuat dengan menetapkan saluran PE kepada imej pendarfluor PE.
2. 3 bidang telah ditangkap dari setiap ruang.
3. Selepas pengimejan dan analisis awal selesai, tetapan ambang (pintu log) untuk pemindahan positif dan negatif telah ditetapkan oleh perisian FCS.
Kawalan kualiti sel stem
Rajah berikut (Rajah 1) menunjukkan prosedur bagi terapi sel stem .
Rajah 1: Prosedur untuk terapi sel stem
Keputusan:
Menentukan kepekatan, daya maju, diameter dan pengagregatan AdMSC.
Daya maju AdMSC ditentukan oleh AO/PI, Prosedur aplikasi dwi-warna telah dibuat dengan menetapkan saluran Hijau dan saluran Merah kepada imej AO dan pendarfluor PI, serta medan terang.Contoh imej ditunjukkan dalam Rajah 2.
Rajah 2. Imej sebelum pengangkutan dan selepas pengangkutan AdMSC.A. Sebelum pengangkutan;imej perwakilan ditunjukkan.B. Selepas pengangkutan;imej perwakilan ditunjukkan.
Daya maju AdMSC telah berubah secara drastik selepas pengangkutan jika dibandingkan dengan sebelum pengangkutan.Daya maju sebelum pengangkutan ialah 92%, tetapi berkurangan kepada 71% selepas pengangkutan.Hasilnya ditunjukkan dalam Rajah 3.
Rajah 3. Keputusan daya maju AdMSC (Sebelum pengangkutan dan selepas pengangkutan)
Diameter dan pengagregatan juga ditentukan oleh Countstar Rigel.Diameter AdMSC telah berubah secara drastik selepas pengangkutan jika dibandingkan dengan sebelum pengangkutan.Diameter sebelum pengangkutan ialah 19µm, tetapi ia meningkat kepada 21µm selepas pengangkutan.Pengagregatan sebelum pengangkutan ialah 20%, tetapi ia meningkat kepada 25% selepas pengangkutan.Daripada imej yang ditangkap oleh Countstar Rigel, fenotip AdMSC telah diubah secara drastik selepas pengangkutan.Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 4.
Rajah 4: Hasil diameter dan pengagregatan.J: Imej perwakilan AdMSC, fenotip AdMSC telah diubah secara drastik selepas pengangkutan.B: Pengagregatan sebelum pengangkutan ialah 20%, tetapi ia meningkat kepada 25% selepas pengangkutan.C: Diameter sebelum pengangkutan ialah 19µm, tetapi ia meningkat kepada 21µm selepas pengangkutan.
Tentukan imunofenotip AdMSC oleh Countstar Rigel
Imunofenotip AdMSC ditentukan oleh Countstar Rigel, AdMSC diinkubasi dengan antibodi yang berbeza masing-masing (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Prosedur aplikasi warna isyarat telah dibuat dengan menetapkan saluran Hijau kepada imej pendarfluor PE, ditambah dengan medan terang.Segmen rujukan gambar medan terang telah digunakan sebagai topeng untuk mencuba isyarat pendarfluor PE.Keputusan CD105 ditunjukkan (Rajah 5).
Rajah 5: Keputusan CD105 AdMSC ditentukan oleh Countstar Rigel.J: Analisis kuantitatif peratusan positif CD105 dalam sampel berbeza oleh perisian FCS express 5 plus.B: Imej berkualiti tinggi membekalkan maklumat morfologi tambahan.C: Keputusan yang disahkan oleh lakaran kecil setiap sel tunggal, alat perisian FCS membahagikan sel kepada kumpulan yang berbeza mengikut ekspresi protein yang berbeza-beza.
Keputusan antibodi lain ditunjukkan dalam Rajah 6
Rajah 6: A: Imej perwakilan ASC dengan morfologi berbentuk gelendong biasa.Ditangkap oleh mikroskop OLYMPUS.Pembesaran asal, (10x).B: Pembezaan adipogenik ASC dibuktikan dengan pewarnaan Ruthenium Red yang menunjukkan kawasan mineralisasi.Ditangkap oleh mikroskop OLYMPUS.Pembesaran asal (10x).C: Pencirian Countstar FL bagi ASC.
Ringkasan:
Countstar FL boleh memantau kepekatan, daya maju, dan ciri fenotip (dan perubahannya) semasa pengeluaran dan pembezaan sel stem ini.FCS express membekalkan fungsi untuk menyemak setiap sel isyarat, mengesahkan data melalui imej.Pengguna juga boleh mempunyai keyakinan untuk menjalankan eksperimen seterusnya berdasarkan keputusan Countstar Rigel.Countstar Rigel menawarkan kaedah yang pantas, canggih dan boleh dipercayai untuk kawalan kualiti sel stem.
