Protokol Eksperimen
% sitotoksisiti dikira oleh persamaan di bawah.
Sitotoksisiti % = (Kiraan hidup kawalan – Kiraan hidup dirawat) / Kiraan hidup kawalan × 100
Dengan melabelkan sel tumor sasaran dengan calcein AM bukan toksik, bukan radioaktif atau transfek dengan GFP, kita boleh memantau pembunuhan sel tumor oleh sel CAR-T.Walaupun sel kanser sasaran hidup akan dilabelkan oleh calcein hijau AM atau GFP, sel mati tidak dapat mengekalkan pewarna hijau.Hoechst 33342 digunakan untuk mengotorkan semua sel (kedua-dua sel T dan sel tumor), sebagai alternatif, sel tumor sasaran boleh diwarnai dengan calcein AM yang terikat membran, PI digunakan untuk mengotorkan sel mati (kedua-dua sel T dan sel tumor).Strategi pewarnaan ini membolehkan untuk mendiskriminasi sel yang berbeza.
E: Sitotoksisiti bergantung Nisbah T K562
Contoh imej pendarfluor Hoechst 33342, CFSE, PI ialah sel sasaran K562 pada t = 3 jam
Imej pendarfluor yang terhasil menunjukkan peningkatan dalam sel Sasaran Hoechst+CFSE+PI+ apabila nisbah E: T meningkat
