Is-sistema Countstar tgħaqqad iċ-ċitometru tal-immaġni u l-counter taċ-ċelluli fi strument wieħed fuq il-bank.Din is-sistema tal-immaġini taċ-ċelluli mmexxija mill-applikazzjoni, kompatta u awtomatizzata tipprovdi soluzzjoni kollha f'wieħed għar-riċerka taċ-ċelluli tal-kanċer, inkluż l-għadd taċ-ċelluli, il-vijabbiltà (AO/PI, trypan blue), l-apoptożi (Annexin V-FITC/PI), iċ-ċelluli ċiklu (PI), u trasfezzjoni GFP/RFP.
Astratt
Il-kanċer huwa wieħed mill-kawżi ewlenin tal-mewt madwar id-dinja, u l-iżvilupp ta 'metodi ġodda ta' trattament tal-kanċer huwa ta 'sinifikat kbir.Iċ-ċellula tal-kanċer hija l-oġġett bażiku ta 'riċerka tal-kanċer, jeħtieġ li tiġi evalwata informazzjoni varji miċ-ċellula tal-kanċer.Dan il-qasam tar-riċerka jeħtieġ analiżi taċ-ċelluli rapida, affidabbli, sempliċi u dettaljata.Is-sistema Countstar tipprovdi pjattaforma ta 'soluzzjoni sempliċi għall-analiżi taċ-ċelluli tal-kanċer.
Studja l-Apoptożi taċ-Ċelloli tal-Kanċer minn Countstar Rigel
L-analiżi tal-apoptosi jintużaw b'mod regolari f'ħafna laboratorji għal skopijiet ta' varjetà mill-valutazzjoni tas-saħħa tal-kulturi taċ-ċelluli sa l-evalwazzjoni tat-tossiċità ta 'panel ta' komposti.
Assaġġ tal-apoptożi huwa tip użat għad-determinazzjoni tal-perċentwal tal-apoptożi taċ-ċelluli bil-metodu tat-tbajja tal-Annexin V-FITC/PI.L-Anness V jeħel mal-fosfatidilserina (PS) b'ċellula bikrija tal-apoptożi jew ċellula tan-nekrożi.PI jidħol biss fiċ-ċelluli nekrotiċi/apoptotiċi fi stadju tard ħafna.(Figura 1)
A: apoptożi bikrija Annexin V (+), PI (-)
B: apoptożi tard Annexin V (+), PI (+)
Figura 1: Dettalji mkabbra ta' stampi ta' Countstar Rigel (5 x ingrandiment) ta' 293 ċellula, ittrattati b'Annex V FITC u PI
Analiżi taċ-Ċiklu taċ-Ċellola taċ-Ċellola tal-Kanċer
Iċ-ċiklu taċ-ċelluli jew iċ-ċiklu tad-diviżjoni taċ-ċelluli huwa s-serje ta 'avvenimenti li jseħħu f'ċellula li jwasslu għad-diviżjoni tagħha u d-duplikazzjoni tad-DNA tagħha (replikazzjoni tad-DNA) biex jipproduċu żewġ ċelluli bint.F'ċelloli b'nukleu, bħal fl-ewkarjoti, iċ-ċiklu taċ-ċelluli huwa wkoll maqsum fi tliet perjodi: interfażi, il-fażi mitotika (M), u ċitokinesi.Il-jodur tal-propidju (PI) huwa żebgħa tat-tebgħa nukleari li tintuża ta 'spiss biex ikejjel iċ-ċiklu taċ-ċelluli.Minħabba li ż-żebgħa ma tistax tidħol fiċ-ċelloli ħajjin, iċ-ċelloli huma mwaħħla bl-etanol qabel it-tbajja '.Iċ-ċelloli kollha mbagħad jiġu mtebbgħin.Iċ-ċelloli li qed jippreparaw għad-diviżjoni se jkun fihom ammonti dejjem akbar ta 'DNA u juru fluworexxenza proporzjonalment miżjuda.Differenzi fl-intensità tal-fluworexxenza huma użati biex jiddeterminaw il-perċentwal ta 'ċelluli f'kull fażi taċ-ċiklu taċ-ċelluli.Countstar jista 'jaqbad l-immaġni u r-riżultati se jintwerew fis-softwer FCS express.(Figura 2)
Figura 2: MCF-7 (A) u 293T (B) kienu mtebbgħin b'Kit ta 'Sejbien taċ-ċiklu taċ-ċelluli b'PI, ir-riżultati ġew determinati minn Countstar Rigel, u analizzati minn FCS express.
Determinazzjoni ta' Vijabbiltà u Trasfezzjoni tal-GFP fiċ-Ċellula
Matul il-bijoproċess, il-GFP spiss jintuża biex jingħaqad ma 'proteina rikombinanti bħala indikatur.Iddetermina l-GFP fluworexxenti jista jirrifletti l-espressjoni tal-proteina fil-mira.Countstar Rigel joffri analiżi veloċi u sempliċi għall-ittestjar tat-trasfezzjoni tal-GFP kif ukoll tal-vijabbiltà.Iċ-ċelloli kienu mtebbgħin b'jodur tal-propidju (PI) u Hoechst 33342 biex jiddefinixxu l-popolazzjoni taċ-ċelluli mejta u l-popolazzjoni taċ-ċelluli totali.Countstar Rigel joffri metodu rapidu u kwantitattiv għall-evalwazzjoni tal-effiċjenza u l-vijabbiltà tal-espressjoni tal-GFP fl-istess ħin.(Figura 4)
Figura 4: Iċ-ċelloli jinsabu bl-użu ta 'Hoechst 33342 (blu) u l-perċentwal ta' ċelloli li jesprimu GFP (aħdar) jista 'jiġi ddeterminat faċilment.Ċellola mhux vijabbli huma mtebbgħin bil-jodur tal-propidju (PI; aħmar).
Vijabilità u Għadd taċ-Ċelloli
L-għadd AO/PI Dual-fluoresces huwa t-tip ta 'assaġġ użat għall-iskoperta tal-konċentrazzjoni taċ-ċelluli, il-vijabbiltà.Huwa maqsum f'għadd ta 'linji taċ-ċelluli u għadd ta' ċelluli primarji skond it-tip ta 'ċelluli differenti.Is-soluzzjoni fiha taħlita tat-tebgħa ta 'aċidu nuklejku aħdar-fluworexxenti, oranġjo acridine, u t-tebgħa ta' aċidu nuklejku redfluorescent, jodur tal-propidju.Il-jodur tal-propidju huwa żebgħa ta 'esklużjoni tal-membrana li tidħol biss fiċ-ċelloli b'membrani kompromessi filwaqt li l-acridine orange jippenetra ċ-ċelloli kollha f'popolazzjoni.Meta ż-żewġ żebgħat huma preżenti fin-nukleu, jodur tal-propidju jikkawża tnaqqis fil-fluworexxenza oranġjo tal-acridine permezz tat-trasferiment tal-enerġija tar-reżonanza tal-fluworexxenza (FRET).Bħala riżultat, ċelluli nukleati b'membrani intatti tebgħu fl-aħdar fluworexxenti u jingħaddu bħala ħajjin, filwaqt li ċelluli nukleati b'membrani kompromessi jtebbgħu biss aħmar fluworexxenti u jingħaddu bħala mejta meta tuża s-sistema Countstar Rigel.Materjal mhux nukleat bħal ċelluli ħomor tad-demm, plejtlits u debris ma jiffluworexxewx u huma injorati mis-softwer Countstar Rigel.(Figura 5)
Figura 5: Countstar ottimizza metodu ta 'tbajja ta' fluworexxenza doppja għal determinazzjoni sempliċi u preċiża tal-konċentrazzjoni u l-vijabbiltà tal-PBMC.Kampjuni mtebbgħin bl-AO/PI jistgħu jiġu analizzati bil-Counstar Rigel
