Astratt: Iċ-ċelloli staminali mesenkimali huma subsett ta 'ċelloli staminali pluripotenti li jistgħu jiġu iżolati mill-mesoderm.Bit-tiġdid ta 'awto-replikazzjoni tagħhom u l-karatteristiċi ta' differenzjazzjoni f'diversi direzzjonijiet, għandhom potenzjal għoli għal terapiji varji fil-mediċina.Iċ-ċelloli staminali mesenkimali għandhom fenotip immuni uniku u kapaċità ta 'regolazzjoni immuni.Għalhekk, iċ-ċelloli staminali mesenkimali diġà jintużaw ħafna fi trapjanti ta 'ċelloli staminali, inġinerija tat-tessuti, u trapjant ta' organi.U lil hinn minn dawn l-applikazzjonijiet, huma użati bħala għodda ideali fl-inġinerija tat-tessuti bħala ċelloli seeder f'serje ta 'esperimenti ta' riċerka bażika u klinika.Sa issa, m'hemmx metodu u standard aċċettati b'mod wiesa' għall-kontroll tal-kwalità taċ-ċelloli staminali mesenkimali.Il-Countstar Rigel jista 'jissorvelja l-konċentrazzjoni, il-vijabbiltà, u l-karatteristiċi tal-fenotip (u l-bidliet tagħhom) matul il-produzzjoni u d-divrenzjar ta' dawn iċ-ċelloli staminali.Il-Countstar Rigel għandu wkoll il-vantaġġ li jikseb informazzjoni morfoloġika addizzjonali, ipprovduta mir-reġistrazzjonijiet tal-immaġni permanenti brightfield u bbażati fuq il-fluworexxenza matul il-proċess kollu tal-monitoraġġ tal-kwalità taċ-ċelluli.Il-Countstar Rigel joffri metodu veloċi, sofistikat u affidabbli għall-kontroll tal-kwalità taċ-ċelloli staminali.
Materjali u metodi:
Iċ-ċelloli staminali mesenkimali derivati mill-adipożi (AdMSCs) ġew rigalati mill-Professur Nianmin Qi, soluzzjoni ta 'tbajja' AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antikorp: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs ġew kultivati f'inkubatur umidifikat ta '37℃, 5% CO2.Diġest bi trypsin qabel l-użu.
Il-proċedura tat-tbajja tal-markatur tas-CD ġiet segwita bħala l-manwal tal-antikorp.
Sejbien tal-markatur tas-CD ma' Countstar Rigel:
1. Inħolqot proċedura ta 'applikazzjoni tal-kulur tas-sinjal billi ssettja l-kanal tal-PE għal fluworexxenza tal-immaġni tal-PE.
2. Inqabdu 3 għelieqi minn kull kamra.
3. Wara li tlestew l-immaġini u l-analiżi inizjali, l-issettjar tal-limitu (log gate) għal trasfezzjoni pożittiva u negattiva ġie stabbilit permezz ta 'softwer FCS.
Kontroll tal-kwalità taċ-ċelloli staminali
Il-Figura li ġejja (Figura 1) turi l-proċedura ta ' terapija taċ-ċelloli staminali .
Figura 1: Il-proċedura għat-terapija taċ-ċelloli staminali
Riżultati:
Id-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni, il-vijabbiltà, id-dijametru, u l-aggregazzjoni tal-AdMSCs.
Il-vijabbiltà ta 'AdMSCs ġiet iddeterminata minn AO/PI, Inħolqot proċedura ta' applikazzjoni b'żewġ kuluri billi tissettja l-kanal Paper u l-kanal Aħmar għal immaġni AO u fluworexxenza PI, flimkien ma 'kamp qawwi.Immaġini ta 'eżempju ġew murija fil-Figura 2.
Figura 2. Stampi ta 'qabel it-trasport u wara t-trasport ta' AdMSCs.A. Qabel it-trasport;tintwera immaġini rappreżentattiva.B. Wara t-trasport;tintwera immaġini rappreżentattiva.
Il-vijabbiltà tal-AdMSCs inbidlet drastikament wara t-trasport meta mqabbla ma 'qabel it-trasport.Il-vijabbiltà qabel it-trasport kienet 92%, iżda naqset għal 71% wara t-trasport.Ir-riżultat intwera fil-Figura 3.
Figura 3. Ir-riżultati tal-vijabbiltà tal-AdMSCs (Qabel it-trasport u wara t-trasport)
Id-dijametru u l-aggregazzjoni ġew determinati wkoll minn Countstar Rigel.Id-dijametru ta 'AdMSCs inbidel drastikament wara t-trasport meta mqabbel ma' qabel it-trasport.Id-dijametru qabel it-trasport kien 19µm, iżda żdied għal 21µm wara t-trasport.L-aggregazzjoni ta 'qabel it-trasport kienet ta' 20%, iżda żdiedet għal 25% wara t-trasport.Mill-immaġini maqbuda minn Countstar Rigel, il-fenotip ta 'AdMSCs inbidel drastikament wara t-trasport.Ir-riżultati ġew murija fil-Figura 4.
Figura 4: Ir-riżultati tad-dijametru u l-aggregazzjoni.A: L-immaġini rappreżentattivi ta 'AdMSCs, il-fenotip ta' AdMSCs ġew mibdula drastikament wara t-trasport.B: L-aggregazzjoni qabel it-trasport kienet 20%, iżda żdiedet għal 25% wara t-trasport.C: Id-dijametru qabel it-trasport kien 19µm, iżda żdied għal 21µm wara t-trasport.
Iddetermina l-immunofenotip ta 'AdMSCs minn Countstar Rigel
L-immunofenotip ta 'AdMSCs ġew determinati minn Countstar Rigel, AdMSCs ġew inkubati b'antikorpi differenti rispettivament (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Inħoloq proċedura ta 'applikazzjoni tal-kulur tas-sinjal billi ssettja kanal Aħdar għal fluworexxenza tal-immaġni tal-PE, flimkien ma' kamp qawwi.Is-segmentazzjoni ta 'referenza ta' stampa ta 'kamp qawwi ġiet applikata bħala maskra biex tieħu kampjun tas-sinjal tal-fluworexxenza PE.Ir-riżultati ta 'CD105 intwerew (Figura 5).
Figura 5: Ir-riżultati CD105 ta 'AdMSCs ġew determinati minn Countstar Rigel.A: Analiżi kwantitattiva tal-persentaġġ pożittiv ta 'CD105 f'kampjuni differenti minn FCS express 5 plus software.B: Immaġini ta 'kwalità għolja jipprovdu informazzjoni morfoloġika addizzjonali.C: Riżultati vvalidati minn thumbnails ta 'kull ċellula waħda, l-għodod tas-softwer FCS qasmu ċ-ċelloli fi gruppi differenti skont l-espressjoni tal-proteina li tvarja tagħhom.
Riżultati ta 'antikorpi oħra ġew murija f'Fig 6
Figura 6: A: Immaġini rappreżentattiva ta 'ASCs b'morfoloġija tipika f'forma ta' magħżel.Maqbud mill-mikroskopju OLYMPUS.Ingrandiment oriġinali, (10x).B: Id-divrenzjar adipoġeniku ta 'ASCs huwa evidenzjat minn tbajja' Ruthenium Red li turi żoni ta' mineralizzazzjoni.Maqbud mill-mikroskopju OLYMPUS.Ingrandiment oriġinali (10x).C: Karatterizzazzjoni Countstar FL ta 'ASCs.
Sommarju:
Il-Countstar FL jista 'jissorvelja l-konċentrazzjoni, il-vijabbiltà, u l-karatteristiċi tal-fenotip (u l-bidliet tagħhom) matul il-produzzjoni u d-divrenzjar ta' dawn iċ-ċelloli staminali.FCS express jipprovdi l-funzjoni biex tirrevedi kull ċellula tas-sinjal, tivvalida d-data permezz tal-immaġni.L-utent jista 'wkoll ikollu l-kunfidenza biex iwettaq l-esperimenti li jmiss ibbażati fuq ir-riżultati ta' Countstar Rigel.Il-Countstar Rigel joffri metodu veloċi, sofistikat u affidabbli għall-kontroll tal-kwalità taċ-ċelloli staminali.
