Countstar စနစ်သည် ရုပ်ပုံ ဆိုက်တိုမီတာနှင့် ဆဲလ်ကောင်တာများကို ခုံတန်းလျားထိပ်တူရိယာတစ်ခုအဖြစ် ပေါင်းစပ်ထားသည်။ဤအပလီကေးရှင်းမှမောင်းနှင်သော၊ ကျစ်လျစ်သော၊ နှင့် အလိုအလျောက်ဆဲလ်ပုံရိပ်ဖော်စနစ်သည် ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်း၊ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း (AO/PI၊ trypan blue)၊ apoptosis (Annexin V-FITC/PI)၊ ဆဲလ်များအပါအဝင် ကင်ဆာဆဲလ်သုတေသနအတွက် အလုံးစုံပါဝင်သည့်အဖြေကို ပေးဆောင်ပါသည်။ စက်ဝန်း (PI) နှင့် GFP/RFP ကူးပြောင်းမှု။
စိတ္တဇ
ကင်ဆာသည် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းတွင် သေဆုံးရခြင်း၏ အဓိကအကြောင်းရင်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး ကင်ဆာကုသမှုနည်းလမ်းသစ်များ တီထွင်မှုသည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။ကင်ဆာကလာပ်စည်းသည် ကင်ဆာ၏အခြေခံသုတေသနအရာဝတ္ထုဖြစ်ပြီး အချက်အလက်အမျိုးမျိုးကို ကင်ဆာဆဲလ်များမှ အကဲဖြတ်ရန် လိုအပ်သည်။ဤသုတေသနဧရိယာသည် လျင်မြန်သော၊ ယုံကြည်စိတ်ချရသော၊ ရိုးရှင်းပြီး အသေးစိတ်ဆဲလ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုလိုအပ်ပါသည်။Countstar စနစ်သည် ကင်ဆာဆဲလ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ရိုးရှင်းသောဖြေရှင်းချက်ပလက်ဖောင်းကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။
Countstar Rigel မှ Cancer Cell Apoptosis ကိုလေ့လာပါ။
Apoptosis စစ်ဆေးမှုများကို ဓာတ်ခွဲခန်းများစွာတွင် ပုံမှန်အားဖြင့် ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုများကို အကဲဖြတ်ခြင်းမှ ဒြပ်ပေါင်းများ၏ အဆိပ်သင့်မှုကို အကဲဖြတ်ခြင်းအထိ အမျိုးမျိုးသောရည်ရွယ်ချက်များအတွက် ဓါတ်ခွဲခန်းများစွာတွင် ပုံမှန်အသုံးပြုကြသည်။
Apoptosis assay သည် Annexin V-FITC/PI staining method ဖြင့် ဆဲလ်များ၏ apoptosis ရာခိုင်နှုန်းကို ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့် အမျိုးအစားတစ်ခုဖြစ်သည်။Annexin V သည် အစောပိုင်း apoptosis cell သို့မဟုတ် necrosis cell နှင့် phosphatidylserine (PS) နှင့် ချိတ်ဆက်သည်။PI သည် necrotic/ very late-stage apoptotic cells များသာ ၀င်ရောက်သည်။(ပုံ 1)
A: Early apoptosis Annexin V (+), PI (-)
B-Late apoptosis Annexin V (+), PI (+)
ပုံ 1- Annexin V FITC နှင့် PI ဖြင့် ကုသထားသော ဆဲလ် ၂၉၃ ခုရှိ Countstar Rigel ပုံများ (5 x ချဲ့ခြင်း) ၏ အသေးစိတ်အချက်အလက်များ
Cell Cycle Analysis of Cancer Cell
ဆဲလ်လည်ပတ်မှု သို့မဟုတ် ဆဲလ်ခွဲဝေမှုစက်ဝန်းသည် ဆဲလ်တစ်ခုတွင် ဖြစ်ပျက်နေသော ဖြစ်စဉ်များဖြစ်ပြီး ၎င်း၏ DNA (DNA ပုံတူပွားခြင်း) ကို ခွဲထွက်ရန်နှင့် သမီးလေးဆဲလ်နှစ်ခုကို ထုတ်ပေးရန်အတွက် ဆဲလ်တစ်ခုတွင် ဖြစ်ပျက်နေသည့် ဖြစ်စဉ်များဖြစ်သည်။နူကလိယရှိသောဆဲလ်များတွင်၊ eukaryotes တွင်ကဲ့သို့ပင်၊ ဆဲလ်စက်ဝန်းကိုလည်း interphase၊ mitotic (M) အဆင့်နှင့် cytokinesis ဟူ၍ ကာလသုံးပိုင်းခွဲထားသည်။Propidium iodide (PI) သည် ဆဲလ်လည်ပတ်မှုကို တိုင်းတာရန်အတွက် မကြာခဏအသုံးပြုလေ့ရှိသော နူကလီးယားအရောင်ဆိုးဆေးဖြစ်သည်။ဆိုးဆေးသည် သက်ရှိဆဲလ်များထဲသို့ မ၀င်ရောက်နိုင်သောကြောင့် ဆဲလ်များကို အရောင်မခြယ်မီ အီသနောဖြင့် ပြုပြင်ထားသည်။ထို့နောက် ဆဲလ်များအားလုံးကို စွန်းထင်းစေပါသည်။ခွဲထွက်ရန် ပြင်ဆင်သည့်ဆဲလ်များတွင် DNA ပမာဏ တိုးလာကာ အချိုးကျ အလင်းဖြာထွက်မှုကို ပြသမည်ဖြစ်သည်။ဆဲလ်စက်ဝန်း၏ အဆင့်တစ်ခုစီတွင် ဆဲလ်များ၏ ရာခိုင်နှုန်းကို ဆုံးဖြတ်ရန် fluorescence intensity ကွာခြားချက်များကို အသုံးပြုသည်။Countstar သည် ဓာတ်ပုံကို ဖမ်းယူနိုင်ပြီး ရလဒ်များကို FCS အမြန်ဆော့ဖ်ဝဲတွင် ပြသမည်ဖြစ်သည်။ပုံ (၂)၊
ပုံ 2- MCF-7 (A) နှင့် 293T (B) သည် PI ပါသော ဆဲလ်စက်ဝန်းရှာဖွေရေးကိရိယာဖြင့် စွန်းထင်းနေပြီး ရလဒ်များကို Countstar Rigel မှ ဆုံးဖြတ်ပြီး FCS အမြန်ဖြင့် ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာထားသည်။
ဆဲလ်အတွင်း ရှင်သန်နိုင်စွမ်းနှင့် GFP ကူးပြောင်းမှု သတ်မှတ်ခြင်း
ဇီဝဖြစ်စဉ်အတွင်း၊ GFP ကို အညွှန်းတစ်ခုအဖြစ် ပြန်လည်ပေါင်းစပ်ထားသော ပရိုတင်းများနှင့် ပေါင်းစပ်ရန် မကြာခဏအသုံးပြုသည်။GFP ချောင်းသည် ပစ်မှတ်ပရိုတင်းဖော်ပြမှုကို ထင်ဟပ်စေနိုင်ကြောင်း ဆုံးဖြတ်ပါ။Countstar Rigel သည် GFP အသွင်ကူးပြောင်းမှုနှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် မြန်ဆန်ပြီး ရိုးရှင်းသော စစ်ဆေးမှုတစ်ခု ပေးပါသည်။ဆဲလ်အသေများကို သတ်မှတ်ရန်နှင့် စုစုပေါင်းဆဲလ်လူဦးရေကို သတ်မှတ်ရန်အတွက် Propidium iodide (PI) နှင့် Hoechst 33342 ဖြင့် ဆဲလ်များကို စွန်းထင်းခဲ့သည်။Countstar Rigel သည် GFP စကားအသုံးအနှုန်း ထိရောက်မှုနှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို တစ်ချိန်တည်းတွင် အကဲဖြတ်ရန်အတွက် လျင်မြန်ပြီး အရေအတွက်နည်းလမ်းကို ပေးပါသည်။ပုံ (၄)၊
ပုံ 4- Hoechst 33342 (အပြာ) ကို အသုံးပြု၍ ဆဲလ်များတည်ရှိပြီး GFP ဖော်ပြသည့်ဆဲလ်များ (အစိမ်းရောင်) ရာခိုင်နှုန်းကို အလွယ်တကူ ဆုံးဖြတ်နိုင်သည်။မမြင်နိုင်သောဆဲလ်များကို ပရိုပီဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက် (PI; အနီရောင်) ဖြင့် စွန်းထင်းသည်။
ရှင်သန်နိုင်စွမ်းနှင့် ဆဲလ်အရေအတွက်
AO/PI Dual-fluoresces counting သည် ဆဲလ်များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု၊ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့် စစ်ဆေးမှုအမျိုးအစားဖြစ်သည်။၎င်းသည် မတူညီသောဆဲလ်အမျိုးအစားအလိုက် ဆဲလ်လိုင်းရေတွက်ခြင်းနှင့် မူလဆဲလ်ရေတွက်ခြင်းဟူ၍ ပိုင်းခြားထားသည်။ဖြေရှင်းချက်တွင် အစိမ်းရောင်-ချောင်းမှနျူကလစ်အက်ဆစ်အစွန်းအထင်း၊ အက်ဆစ်ဒင်းလိမ္မော်ရောင်နှင့် အနီရောင်ဖြာထွက်သည့် နျူကလစ်အက်ဆစ်စွန်းထင်း၊ ပရောပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက်တို့ ပေါင်းစပ်ပါဝင်ပါသည်။Propidium iodide သည် acridine လိမ္မော်ရောင်သည် လူဦးရေရှိဆဲလ်အားလုံးကို ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်နေချိန်တွင် အမြှေးပါးများကိုသာ ဖယ်ထုတ်ထားသော ဆိုးဆေးဖြစ်သည်။ဆိုးဆေးနှစ်မျိုးလုံးသည် နူကလိယတွင်ရှိနေသောအခါ၊ ပပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက်သည် fluorescence resonance energy transfer (FRET) ဖြင့် acridine လိမ္မော်ရောင်ဖျော့ဖျော့ကို လျော့နည်းစေသည်။ရလဒ်အနေဖြင့်၊ နဂိုအမြှေးပါးများပါရှိသော နျူကလိယဆဲလ်များသည် ချောင်းစိမ်းရောင်စွန်းထင်းပြီး အသက်ရှင်လျက်ဟု မှတ်ယူကြပြီး နျူကလိယအမြှေးပါးများပါသော ဆဲလ်များသည် ရောင်ရမ်းရောင်သာစွန်းထင်းနေပြီး Countstar Rigel စနစ်ကို အသုံးပြုသည့်အခါ သေဆုံးသည်ဟု မှတ်ယူကြသည်။သွေးနီဥများ၊ သွေးဥများ နှင့် အပျက်အစီးများ ကဲ့သို့သော နျူကလိယ မပါဝင်သည့် ပစ္စည်း များသည် မီးချောင်းများ မထွက်ဘဲ Countstar Rigel ဆော့ဖ်ဝဲလ်မှ လျစ်လျူရှုထားသည်။ပုံ (၅)၊
ပုံ 5- Countstar သည် PBMC အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို ရိုးရှင်း၊ တိကျစွာ ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် Dual-fluorescence စွန်းထင်းသည့်နည်းလမ်းကို အကောင်းဆုံးပြင်ဆင်ထားပါသည်။AO/PI ဖြင့် စွန်းထင်းနေသော နမူနာများကို Counstar Rigel ဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်ပါသည်။
