သွေးတစ်ခုလုံးရှိ leukocytes များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် လက်တွေ့စမ်းသပ်ခန်း သို့မဟုတ် သွေးဘဏ်တွင် ပုံမှန်စစ်ဆေးမှုတစ်ခုဖြစ်သည်။Leukocytes များ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့်ရှင်သန်နိုင်စွမ်းသည်သွေးသိုလှောင်မှုအရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုအဖြစ်အရေးကြီးသောညွှန်းကိန်းဖြစ်သည်။leukocyte အပြင်၊ သွေးတစ်ခုလုံးတွင် သွေးဥများ၊ သွေးနီဥများ၊ သို့မဟုတ် ဆယ်လူလာအပျက်အစီးများ အများအပြားပါရှိသည်၊ ၎င်းသည် အဏုကြည့်မှန်ပြောင်း သို့မဟုတ် တောက်ပသောအကွက်ဆဲလ်ကောင်တာအောက်တွင် သွေးတစ်ခုလုံးကို တိုက်ရိုက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် မဖြစ်နိုင်ပေ။သွေးဖြူဥများကို ရေတွက်ရန် သမားရိုးကျနည်းလမ်းများတွင် အချိန်ကုန်သော RBC lysis လုပ်ငန်းစဉ် ပါဝင်ပါသည်။
AOPI Dual-fluoresces counting သည် ဆဲလ်များ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့် စစ်ဆေးမှုအမျိုးအစားဖြစ်သည်။ဖြေရှင်းချက်မှာ acridine လိမ္မော်ရောင် (အစိမ်းရောင်-မီးချောင်း နျူကလိစ်အက်ဆစ် အစွန်းအထင်း) နှင့် ပရောပဒီယမ် အိုင်အိုဒိုက် (အနီရောင်-ဖြာထွက် နျူကလိစ်အက်ဆစ် အစွန်းအထင်း) တို့ ပေါင်းစပ်ထားသည်။Propidium iodide (PI) သည် ပျက်စီးနေသော အမြှေးပါးများဖြင့် ဆဲလ်များသာ ဝင်ရောက်သည့် အမြှေးပါး ဆိုးဆေးဖြစ်ပြီး acridine လိမ္မော်ရောင်သည် လူဦးရေအတွင်းရှိ ဆဲလ်အားလုံးကို စိမ့်ဝင်နိုင်သော်လည်း၊ဆိုးဆေးနှစ်မျိုးလုံးသည် နူကလိယတွင်ရှိနေသောအခါ၊ ပပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက်သည် fluorescence resonance energy transfer (FRET) ဖြင့် acridine လိမ္မော်ရောင်ဖျော့ဖျော့ကို လျော့နည်းစေသည်။ရလဒ်အနေဖြင့်၊ နဂိုအမြှေးပါးများပါရှိသော နျူကလီးယပ်ဆဲလ်များသည် ချောင်းစိမ်းရောင်စွန်းထင်းပြီး အသက်ရှင်လျက်ဟု သတ်မှတ်ခံရသော်လည်း ပျက်စီးနေသောအမြှေးပါးရှိ နူကလီးယပ်ဆဲလ်များသည် မီးချောင်းများသာ အနီရောင်စွန်းထင်းနေပြီး Countstar® Rigel စနစ်အား အသုံးပြုသည့်အခါ သေဆုံးသည်ဟု မှတ်ယူကြသည်။
Countstar Rigel သည် သွေးတစ်ခုလုံးရှိ ဆဲလ်များအတွင်း လျင်မြန်စွာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်စေမည့် ရှုပ်ထွေးသော ဆဲလ်လူဦးရေ ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းအတွက် စံပြဖြေရှင်းချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။
စမ်းသပ်မှုလုပ်ထုံးလုပ်နည်း-
1. သွေးနမူနာ 20 µl ကိုယူ၍ PBS ၏ 180 µl တွင်နမူနာကို အအေးခံပါ။
2. 12µl AO/PI ဖြေရှင်းချက်ကို 12µl နမူနာထဲသို့ ထည့်ပါ၊ ပိုက်ဆက်နှင့် ညင်သာစွာ ရောစပ်ပါ။
3. 20µl အရောအနှောကို အခန်းလျှောထဲသို့ ဆွဲပါ။
4. ဆဲလ်များကို အခန်းထဲတွင် ၁ မိနစ်ခန့် အခြေချခွင့်ပြုပါ။
5.ဆလိုက်ကို Countstar FL တူရိယာထဲသို့ ပိုးသတ်ပါ။
6. "AO/PI Viability" assay ကိုရွေးချယ်ပါ၊ ထို့နောက် ဤနမူနာအတွက် နမူနာ ID ကိုထည့်ပါ။
7. စမ်းသပ်မှုစတင်ရန် Dilution အချိုး၊ Cell အမျိုးအစားကို ရွေးပါ၊ 'Run' ကိုနှိပ်ပါ။
သတိပြုရန်- AO နှင့် PI သည် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ကင်ဆာရောဂါတစ်မျိုးဖြစ်သည်။အော်ပရေတာသည် အရေပြားနှင့် မျက်လုံးများနှင့် တိုက်ရိုက်မထိတွေ့စေရန် တစ်ကိုယ်ရေ အကာအကွယ်ပစ္စည်း (PPE) ဝတ်ဆင်ရန် အကြံပြုထားသည်။
ရလဒ်:
1. တောက်ပသော ကွင်းပြင်ပုံရိပ်
သွေးတစ်ခုလုံး၏တောက်ပသောအကွက်တွင် WBC ၏သွေးနီဆဲလ်များကြားတွင်မမြင်နိုင်ပါ။(ပုံ 1)
ပုံ 1 တောက်ပသောအကွက်သည် သွေးတစ်ခုလုံး၏ပုံ။
2. သွေးတစ်ခုလုံး၏ မီးချောင်းပုံ
AO နှင့် PI ဆိုးဆေးသည် ဆဲလ်များ၏ ဆဲလ်နူကလိယရှိ DNA တွင် အစွန်းအထင်းများဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ Platelets၊ သွေးနီဥများ သို့မဟုတ် ဆဲလ်အပျက်အစီးများသည် leukocytes အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းရလဒ်ကို မထိခိုက်စေနိုင်ပါ။Live leukocytes (Green) နှင့် dead leukocytes (အနီရောင်) ကို fluorescence ပုံများတွင် အလွယ်တကူ မြင်နိုင်သည်။ပုံ (၂)၊
ပုံ 2 အသွေးတစ်ခုလုံး၏ မီးချောင်းပုံများ။(က)။AO Channel ၏ ရုပ်ပုံ၊(ခ) PI Channel ၏ ရုပ်ပုံ၊(ဂ) AO နှင့် PI Channel ၏ ပုံများကို ပေါင်းစည်းပါ။
3. အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် leukocytes များ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်း
Countstar FL ဆော့ဖ်ဝဲလ်သည် အခန်းခွဲသုံးခု၏ဆဲလ်များကို အလိုအလျောက်ရေတွက်ပြီး စုစုပေါင်း WBC ဆဲလ်အရေအတွက် (1202)၊ အာရုံစူးစိုက်မှု (1.83 x 106 ဆဲလ်/ml) နှင့် ရှင်သန်နိုင်စွမ်း (82.04%) တို့ကို တွက်ချက်ပေးပါသည်။ထပ်လောင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း သို့မဟုတ် ဒေတာသိမ်းဆည်းခြင်းအတွက် တစ်ကိုယ်လုံးကို သွေးနှင့် ဒေတာများကို PDF၊ Image သို့မဟုတ် Excel အဖြစ် အလွယ်တကူ တင်ပို့နိုင်သည်။
ပုံ 3 Countstar Rigel Software ၏ ဖန်သားပြင်ဓာတ်ပုံ
