सम्पूर्ण रगतमा ल्युकोसाइटहरू विश्लेषण गर्नु क्लिनिकल ल्याब वा ब्लड बैंकमा नियमित परीक्षण हो।ल्युकोसाइट्सको एकाग्रता र व्यवहार्यता रगत भण्डारणको गुणस्तर नियन्त्रणको रूपमा महत्त्वपूर्ण सूचकांक हो।ल्युकोसाइट बाहेक, सम्पूर्ण रगतमा ठूलो संख्यामा प्लेटलेटहरू, रातो रक्त कोशिकाहरू, वा सेलुलर मलबेहरू हुन्छन्, जसले सम्पूर्ण रगतलाई माइक्रोस्कोप वा उज्यालो फिल्ड सेल काउन्टरमुनि विश्लेषण गर्न असम्भव बनाउँदछ।सेतो रक्त कोशिकाहरू गणना गर्ने परम्परागत विधिहरूमा आरबीसी लिसिस प्रक्रिया समावेश छ, जुन समय-खपत छ।
AOPI डुअल-फ्लोरेसेस गणना सेल एकाग्रता र व्यवहार्यता पत्ता लगाउन प्रयोग गरिने परख प्रकार हो।समाधान भनेको एक्रिडाइन सुन्तला (हरियो फ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग) र प्रोपिडियम आयोडाइड (रातो-फ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग) को संयोजन हो।प्रोपिडियम आयोडाइड (PI) एक झिल्ली बहिष्करण डाई हो जुन केवल सम्झौता झिल्ली भएका कक्षहरूमा प्रवेश गर्दछ, जबकि एक्रिडाइन सुन्तला जनसंख्यामा सबै कोशिकाहरू प्रवेश गर्न सक्षम हुन्छ।जब दुबै रंगहरू न्यूक्लियसमा उपस्थित हुन्छन्, प्रोपिडियम आयोडाइडले फ्लोरोसेन्स रेजोनेन्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारा एक्रिडाइन सुन्तला प्रतिदीप्तिमा कमी निम्त्याउँछ।नतिजाको रूपमा, अक्षुण्ण झिल्ली भएका न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरू फ्लोरोसेन्ट हरियो दाग हुन्छन् र प्रत्यक्ष रूपमा गनिन्छन्, जबकि सम्झौता गरिएका झिल्लीहरू भएका न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरू फ्लोरोसेन्ट रातो मात्र दाग हुन्छन् र Countstar® Rigel प्रणाली प्रयोग गर्दा मृतका रूपमा गणना गरिन्छ।
काउन्टस्टार रिगेल धेरै जटिल कोशिका आबादी क्यारेक्टराइजेशन एसेसहरूको लागि एक आदर्श समाधान हो, जसले सम्पूर्ण रगतमा सेतो-रक्त-कोशिकाहरूलाई द्रुत रूपमा विश्लेषण गर्न सक्षम पार्छ।
प्रयोगात्मक प्रक्रिया:
1. 20 μl रगतको नमूना लिनुहोस् र नमूनालाई 180 μl PBS मा पातलो गर्नुहोस्।
2. 12µl नमूनामा 12µl AO/PI समाधान थप्नुहोस्, बिस्तारै पिपेटसँग मिसाइएको;
3. च्याम्बर स्लाइडमा 20µl मिश्रण कोर्नुहोस्;
4. कक्षहरूलाई लगभग 1 मिनेटको लागि च्याम्बरमा बस्न अनुमति दिनुहोस्;
5. काउन्टस्टार FL उपकरणमा स्लाइडलाई कीट लगाउनुहोस्;
6. "AO/PI व्यवहार्यता" परख छान्नुहोस्, त्यसपछि यो नमूनाको लागि नमूना ID प्रविष्ट गर्नुहोस्।
7. Dilution अनुपात, सेल प्रकार चयन गर्नुहोस्, परीक्षण सुरु गर्न 'रन' क्लिक गर्नुहोस्।
सावधानी: AO र PI एक सम्भावित कार्सिनोजेन हो।छाला र आँखाको प्रत्यक्ष सम्पर्कबाट बच्न अपरेटरलाई व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरण (पीपीई) लगाउन सिफारिस गरिन्छ।
नतिजा:
1. सम्पूर्ण रगतको उज्यालो क्षेत्र छवि
सम्पूर्ण रगतको उज्यालो क्षेत्र छविमा, रातो रक्त कोशिकाहरू बीच WBCहरू देखिँदैनन्।(चित्र १)
चित्र 1 सम्पूर्ण रगतको उज्यालो क्षेत्र छवि।
2. सम्पूर्ण रगतको प्रतिदीप्ति छवि
AO र PI डाई दुबै कोशिकाको कोशिकाको केन्द्रकमा दाग DNA हुन्।त्यसकारण, प्लेटलेटहरू, रातो रक्त कोशिकाहरू, वा सेलुलर मलबेले ल्युकोसाइट्स एकाग्रता र व्यवहार्यता परिणामलाई असर गर्न असमर्थ छन्।लाइभ ल्युकोसाइट्स (हरियो) र मृत ल्युकोसाइट्स (रातो) लाई फ्लोरोसेन्स छविहरूमा सजिलै देख्न सकिन्छ।(चित्र २)
चित्र 2 सम्पूर्ण रगतको फ्लोरोसेन्स छविहरू।(ए)।AO च्यानल को छवि;(B) PI च्यानलको छवि;(C) AO र PI च्यानलका छविहरू मर्ज गर्नुहोस्।
3. ल्युकोसाइट्स को एकाग्रता र व्यवहार्यता
काउन्टस्टार FL सफ्टवेयरले स्वचालित रूपमा तीन कक्ष खण्डहरूको कक्षहरू गणना गर्दछ र कुल WBC सेल गणना (1202), एकाग्रता (1.83 x 106 कक्षहरू/ml), र % व्यवहार्यता (82.04%) को औसत मूल्य गणना गर्दछ।सम्पूर्ण रगत छविहरू र डाटा सजिलैसँग PDF, छवि वा एक्सेलको रूपमा अतिरिक्त विश्लेषण वा डाटा संग्रहको लागि निर्यात गर्न सकिन्छ।
काउन्टस्टार रिगेल सफ्टवेयरको चित्र ३ स्क्रिनसट
